随即对可疑病菌料抽样进行了组织病理学检查和细菌学检查。对有病变的肺门淋巴结进行石蜡切片,采用H.E.染色,可见以下病理学变化。淋巴结散落分布,部分淋巴细胞溶解,有嗜中性粒细胞浸润,有时有陈旧性化脓灶存在(已钙化,包囊形成)。
取可疑病例的肺组织渗出物、肝组织渗出物、病变肺门淋巴结分别接种于普通营养琼脂,鲜血营养琼脂培养基,经37℃培养箱中培养24 h、48 h后,普通营养琼脂培养基中无细菌生长,鲜血营养琼脂中无细菌生长和溶血现象。接种选择分离培养基如不含甘油的Stomebrink’s培养基的培养,分离物通过测定其培养特性和生化特性进行鉴定,菌落形态粗糙,中心隆起,周围大而边缘不规则。37℃下生长缓慢,22℃或45℃不生长,菌落颜色微白,分型鉴定为牛型分枝杆菌。
怀疑患有结核病后,在进行分离培养的同时对该场进行了全面的流行病学调查。 该场为自繁自养的大型猪场, 近3年未引进 种猪 , 周围一公里范围内无其他养殖场。 9名 饲养 人员经过体检无结核病史。使用的 饲料 为自制混合料(外购预混料和 玉米 豆粕 等大宗原料), 使用了 猪瘟 等多种疫苗, 在现场临床检查未发现群猪咳嗽发病情况。
经询问场主, 在10-11月期间场内 保育猪 发病,当时主要症状为体温升高、拉稀、厌食、精神沉郁、呼吸急促、长时间后消瘦死亡, 死亡率10%左右, 其他病猪经抗生素治疗渐渐康复。 同时该场送病料到华中某大学进行检测,经分离纯化、 生化鉴定, 确定病料中优势菌种为副猪嗜血杆菌。
11月份后该场病情得到稳定。提纯结核菌素(PPD)皮试:在实验室诊断出牛型结核分枝杆菌后,我们在2004年2-5月间分3次对该场存栏的所有 母猪 、部分中猪(50~60 kg)、肥育猪(80~90 kg),参照GB/T18645-2002《动物结核病诊断技术》牛结核菌素PPD皮试方法按2 000 IU/头份进行猪耳根后的皮试。皮试试剂第1次为黑龙江省生物制品一厂生产的牛型结核菌素干冻剂,批号200301,第2次和第3次为中国兽医药品监察所提供,批号2004、1,稀释用生理盐水,进行24 h、28 h、72 h观察。观察结果第1次皮试的母猪全部为待产母猪,第2次和第3次的母猪有一部分后备母猪。
阳性反应的表现为局部发红肿胀,反应剧烈,触摸热痛、稍硬,大小一般在直径2~3 cm左右,最大的达5 cm,多数在接种的部位可见一块发黑的坏死灶。发生阳性反应的猪只一般在12 h内就有反应发生,随后反应仍无多大变化。
净化处理:对全场所有种畜进行PPD试验,筛送出阳性者全部淘汰处理,并对全场进行每周2次的20%生石灰消毒,健康的肥育猪出栏前进行PPD试验,无反应者正常上市,轻度反应者无害化处理。目前该场结核病得到了完全的净化,出栏猪屠宰检验未发现病例。在对该场进行PPD实验的同时我们在另6个大型猪场各选择20头种畜进行相同的PPD皮试,结果均为阴性。?
原因分析:该场发生牛型结核病感染,主要是因为种畜部分带菌,加上湖南2003年高温干旱,气候变化异常,导致 商品猪 感染发病,愈后屠宰检验发现病例。通过调查发现该场自建场至今均未有发生类似病例。分析感染牛型结核杆菌的原因主要可能是:(1)引进的种畜部分感染了结核菌,处于长期带菌状态,一般情况下商品猪未感染发病。(2)使用了感染结核杆菌的牛源成分的饲料,种畜被结核杆菌感染。真正的原因有待于进一步的调查研究。
在大型猪场发生牛型结核杆菌感染发病的报道不多,通过本病例可以促使我们加强对目前全国结核病高发的原因进行多方面的研究,提高全民对食品安全的进一步高度重视。
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