怎样对猪链球菌自家灭活苗-猪链球菌

    猪链球菌病主要是由Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｌ群链球菌引起的猪的一种传染病，根据感染链球菌类群的不同，病猪临床症状主要表现为共济失调、圆圈运动等脑神经炎症状及前后肢关节肿大、跛行；解剖病变主要表现为支气管肺炎、脑膜脑炎、败血症、关节炎、心内膜炎、淋巴结炎、化脓性皮肤脓肿等。在近２０年来，随着规模化养猪的不断发展，猪链球菌病曾在养猪业中普遍流行，给养猪业带来了严重的损失。
    本文根据作者到湖南某猪场进行种猪售后跟踪服务时遇到的该场的产房及保育舍仔猪链球菌病发生率高的情况，从发病仔猪中分离纯化出致病性链球菌，经灭活制成自家灭活苗在该场使用，结果该猪场猪链球菌病的发病率与死亡率均有明显的下降，现将有关疫苗制备及试用情况介绍如下。
    疫苗制备１、症状及病料的采集　产房仔猪或保育仔猪发病急，眼结膜潮红、流泪，出现不同程度的神经症状或前后肢关节肿大，关节患部柔软，触之有疼痛感，内含黄色胶样液体或白色脓样物。挑选有典型神经症状及有关节炎症状的产房仔猪及保育仔猪，且要求在发病初期，没有使用任何抗生素治疗过，体温升高在４１℃以上的病猪多头。剖检发现病猪的脑膜、肺、肝、淋巴结有不同程度的出血点，心包、腹腔有纤维素性渗出物。关节腔内充满黄色胶样液体，有的形成干酪样物附着在关节面。无菌采取病猪的脑、肺、肝、关节等病变部位的组织或关节液，进行细菌的分离和鉴定。
    ２、细菌的分离与鉴定　将采集的病料分别接种到血液琼脂平板培养基上，３７℃培养１２—２４小时。结果可见有针头或针尖大小的灰白色、湿润、粘稠、周围隆起的半透明菌落，有的菌株在马血液琼脂平板上有β—溶血，有的菌株在绵羊血液琼脂平板上菌落周围有α—溶血。菌落直径约０·５—１·０毫米，延长培养时间菌落很少增大或不增大。革兰氏染色镜检：可见单个或成对排列的圆形或椭圆形革兰氏阳性小球菌，有些菌株趋于杆状。在培养基上很少形成链状，而在肉汤中可形成长链状。挑取上述菌落分别划线培养于加入０·１％ＣＡＮ（其作用是抑制除链球菌以外的其他细菌的生长）的琼脂及“脑心汤”试管培养液分离提纯培养。经镜检从脑、肺、肝、关节液分离的菌落中挑选出链球菌，然后进行细菌的鉴定。生化反应：对上述分离到的革兰氏阳性球菌进一步做生化反应进行鉴定，能发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、水杨苷、海藻糖和菊糖，产酸不产气；过氧化氢触酶反应阴性。动物接种：将经分离鉴定挑选出的４份（脑、肺、肝、关节液）链球菌培养液分别给４只家兔腹腔注射，２毫升／只。接种后１２—３６小时内家兔全部死亡，且从死亡家兔的心、肝、脾等器官能分离到单纯的链球菌，故可确定该病猪的脑神经炎及关节炎主要由链球菌感染所致。
    ３、增菌培养和灭活　将分离的４份纯化的链球菌在无菌条件下每份分别接种１０支试管培养液增菌培养６—１２小时，然后把每支试管培养物接种到１瓶５００毫升的“脑心汤”培养液中，３７℃增菌培养１８—２４小时。灭活：用０·３％体积（５００毫升培养液中加入１·５毫升，下同）的福尔马林灭活，福尔马林要逐滴加入，并且要一边加入一边振荡，然后放入培养箱中３７℃恒温培养６小时。为保证灭活效果，期间需要每２小时均匀振荡一次，有条件的最好用振荡培养箱３７℃恒温培养，制成灭活菌苗。
    ４、安全检验　取灭活的培养物在血液琼脂中划线３７℃恒温培养２４小时，观察有无菌落生长。经检验无菌生长后，进行混匀及分装。混合前，分别将每一瓶培养物涂片镜检，看有无其它污染菌，若有，则废弃。在无菌操作环境下，把脑、肺、肝、关节液的培养物按１∶１∶１∶１的比例混匀于大容器内，然后加入０·３％体积的浓度为１０％的硫代硫酸钠中和培养物中的福尔马林，这样可以减少残留福尔马林对猪只的刺激性，同时减少因福尔马林的长时间存在导致细菌的保护性抗原的降解或者抗原性丢失。同时，为了预防或杀灭污染菌，可在１０００毫升混和物中加庆大霉素１００毫克，加入０·０１％体积的硫柳贡防腐，后按需要分装封存，于４℃冰箱中可保存３年有效。疫苗制好后，选５头仔猪，每头猪分别注射５毫升自家苗，若３０分钟内出现如呕吐等异常症状者该批疫苗不能使用。使用效果１、试验材料和方法　从１９９９年３月开始，在该场中试用自家灭活苗，共选取６０头妊娠母猪，分别在１９９９年３月选３０头，２０００年３月选３０头；每批都随机分成２组，每组１５头，分别设为试验组和商品苗对照组。试验组母猪在产前５周及３周各用上述自制灭活疫苗免疫１次，每次３毫升／头。试验组母猪所产仔猪在３—５日龄及１７—１９日龄各免疫１次，首免１毫升／头、二免２毫升／头。商品苗对照组的母猪产前４周免疫一次，４头份／头，所产仔猪２０—２２日龄免疫１次（８０日龄再免疫１次），４头份／头。记录６５日龄前仔猪的生长状况、脑神经炎及关节炎的发生率和死亡率。
    ２、试验结果（见下表）试验组仔猪体况均匀，生长速度一致，出现神经症状及关节肿的病症相对不明显，而且对出现神经症状及关节肿的仔猪用青霉素治疗很容易治愈，仔猪死亡率低。对照组的仔猪个体差异大，神经症状及关节肿症状较明显，用青霉素很难治愈，且体况消瘦，被毛粗乱，仔猪发病率及死亡率高。
    分析及讨论１、由于猪舍结构所限及非全进全出的流水式生产，试验组和对照组的猪在同一猪舍内饲养，会发生水平传染，对试验组结果可能有一定的影响。从试验结果来看，试验组比对照组仔猪的神经症状及关节肿的发生率显著下降（Ｐ＜０·０１）；试验组比对照组仔猪的死亡率也显著下降（Ｐ＜０·０１），说明使用自制链球菌灭活疫苗效果很好。２００１年１月起，该场开始在全场猪群中使用自制链球菌灭活疫苗进行免疫，在跟踪检查中，抽查以往发病率最高的５月份，仔猪神经症状及关节炎的发生率为产房仔猪１·９２％、保育仔猪１·１１％，较以往用商品苗的同期大幅下降。

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