猪干扰素-γ（IFN-γ）elisa 试剂盒说明书

12

密封袊�o:p>

1�?o:p>

备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为�?0�?0�?0�?�?.5�?.25pg/mL

【需要而未提供的试剂和器材【�b style="mso-bidi-font-weight: normal">

1�?st1:chmetcnv w:st="on" unitname="�? sourcevalue="37" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">37ℂ�/st1:chmetcnv>恒温箰�o:p>

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸夳�o:p>

4、蒸馏水

5、一次性试箠�o:p>

6、吸水纸

【操作步骤【�o:p>

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平�?0分钟、�o:p>

2、配液：用蒸馏水�?0倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液、�o:p>

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准�?0��L；待测样本孔中先加入待测样本10��L，再加样本稀释液40��L（即样本稀�?倍）；空白对照孔不加、�o:p>

4、温育： 37ℂ�/st1:chmetcnv>水浴锅或恒温箱温�?0min、�o:p>

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）、�o:p>

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作�?0��L，空白对照孔不加、�o:p>

7、温育：重复4的操作、�o:p>

8、洗板：重复5的操作、�o:p>

9、显色：每孔先加入显色剂A �?0��L，再加入显色剂B� 50��L＋�st1:chmetcnv w:st="on" unitname="�? sourcevalue="37" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">37ℂ�/st1:chmetcnv>避光显色15min、�o:p>

10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50��L，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）、�o:p>

11、测定：以空白孔调零，在终止�?5分钟内，�?50nm波长测量各孔的吸光值（OD值）、�o:p>

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数、�o:p>

【样本要求【�o:p>

1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂、�o:p>

2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放亍�st1:chmetcnv w:st="on" unitname="�? sourcevalue="20" hasspace="False" negative="True" numbertype="1" tcsc="0">-20ℂ�/st1:chmetcnv>保存，但应避免反复冻融、�o:p>

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒、�o:p>

【注意事项【�o:p>

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准、�o:p>

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存、�o:p>

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差、�o:p>

4、牢记样本已经稀�?倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度、�o:p>

5、本试剂盒定量范围为1.25-40pg/mL，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用标准品稀释液稀释后测定准确结果�?.25-40pg/mL范围内），乘以总稀释倍数即为样本最终浓度、�o:p>

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间、�o:p>

7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜、�o:p>

8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用、�o:p>

9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下、�o:p>

【操作程序总结【�o:p>

准备试剂，样品和标准�?b style="mso-bidi-font-weight: normal">

加入准备好的样品和标准品＋�st1:chmetcnv w:st="on" unitname="�? sourcevalue="37" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">37ℂ�/st1:chmetcnv>反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂＋�st1:chmetcnv w:st="on" unitname="�? sourcevalue="37" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">37ℂ�/st1:chmetcnv>反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B＋�st1:chmetcnv w:st="on" unitname="�? sourcevalue="37" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">37ℂ�/st1:chmetcnv>显色15分钟

加入终止涱�o:p>

15分钟之内读OD倻�o:p>

计算

【检测范围【�o:p>

1.25-40pg/mL

【规格【�o:p>

96人份/监�o:p>

【贮藏【�o:p>

2 -8ℂ�/st1:chmetcnv>，避光防潮保存、�o:p>

【有效期【�o:p>

6个月

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