宋珏琳贺月林曾艳
湖南省微生物研究所
一、材料
培养基 麦康凯培养基、三糖铁培养基、伊红美兰琼脂培养基。
指示剂 甲基红指示剂、甲萘酚指示剂。
受试药物复方穿琥宁注射液,每毫升含穿琥宁20毫克和硫酸小檗碱20毫克。由湖南省微生物研究所兽药研究室配制,批号20060312。
对照药物硫酸黄连素注射液(20毫克/毫升),批号20060201。
受试动物断乳仔猪,长白二元杂交,湖南省微生物研究所实验场提供。共50头,体重约10千克,每天定时饮水,饲喂不含任何抗菌药物的自配全价料。
菌种及血清型大肠杆菌标准菌种K88、K99,大肠杆菌0101标准血清,均从中国兽药监察所购买。
二、试验方法
(一)人工感染大肠杆菌治疗试验
动物分组及给药将试验猪随机分成5组,各组隔离饲养。第1组为感染不治疗对照组,第3组、第4组、第5组为感染后肩部肌注复方穿琥宁注射液治疗组,剂量分别为0.5毫升/10千克(低剂量组)、1.0毫升/10千克(中剂量组)、2毫升/10千克(高剂量组),每天2次,3天一疗程。第2组肩部注射硫酸黄连素注射液进行治疗(每天2次,3天为一疗程),剂量为2毫克/千克,分组前用无菌棉签在直肠采样,进行细菌分离培养,用大肠杆菌标准血清0101做凝集试验,以确认无大肠杆菌感染。
细菌人工感染将临床分离的大肠杆菌0101培养肉汤(含菌量为8.0亿/毫升)按每只猪40毫升灌服,进行人工接种。接种后24小时用无菌棉签在直肠采集粪便以判断有无感染力,治疗结束后,采集粪便检查有无0101大肠杆菌。
治疗情况出现拉稀,精神萎顿后连续用药治疗3天,治疗结束后继续观察5天。治疗时每天用无菌棉签采集粪便,结束后1天再采集一次,作接种细菌分离培养,进行大肠杆菌0101血清玻片凝集试验。试验期间观察猪只有无异常行为及其它变化。试验过程中如有猪只死亡,应立即剖解,并进行细菌分离培养鉴定。
疗效判断治愈:用药3天后,腹泻症状消失,粪便成形,精神食欲恢复;显效:经3天治疗后,腹泻停止,但粪便较稀,精神饮食不佳;无效:经3天治疗后,腹泻未停止,程度加重,精神萎靡不振,食饮欲基本废绝。
试验结果用大肠杆菌标准血清型做玻片凝集试验,在试验前确认无大肠杆菌0101感染,人工接种24小时采集粪便中应均存在大肠杆菌0101,表明感染成功。此时观察到猪精神萎顿、饮欲正常、食欲不佳,有些猪开始拉稀,但无水样腹泻。
接种36小时后大约有50%的猪出现腹泻,粪便大多水样,含有未消化颗粒饲料。48小时后全部接种猪出现腹泻,但严重程度不一,约有60%的猪粪便有粘液或泡沫,此时开始用药治疗。各用药组猪症状均有不同程度的好转,其中4、5组90%的猪只治愈,第2组、3组仍有个别猪未治愈,但有一定疗效;第1组感染不治疗组症状不断加重。试验结果见下表。
(二)自然感染大肠杆菌治疗试验
发病情况 2007年4月29日,湖南省宁乡县六渡庵村丁某饲养的2头母猪分别于4月22日、24日产下仔猪10头和13头。于4月27日下午发现个别仔猪拉黄色稀粪,第二天拉稀加重,50%的仔猪拉黄白色稀粪。多数仔猪表现为被毛粗乱,无神爱睡,肛门粘有黄色粪便,腥臭,有的夹有泡沫。4月29日早上死亡仔猪1头,仔猪体温正常,剖解可见肠道、小肠(尤为十二指肠)呈急性卡它性炎症,肠系膜淋巴结肿大,充血、多汁,脾脏肿大。初步确诊为仔猪黄白痢。
病原分离鉴别随机采取死亡猪肠道内容物及粪便分别进行涂片,染色镜检和培养分离,并用大肠杆菌0型血清做凝集试验,并用分离培养菌做动物接种试验,确诊仔猪黄白痢为大肠杆菌感染所致。
治疗方法仔猪肌肉注射复方穿琥宁注射液(0.1毫升/千克)+樟脑磺酸钠(1毫克/千克,分开注射),每天2次,连用3天;母猪注射头孢噻呋钠0.5克/头(用生理盐水10毫升溶解)+樟脑磺酸钠(100毫克/头,分开注射),每天1次,连用3天。
实验结果 共治疗仔猪23头,治愈率95%,有效率为100%。确诊为黄痢的占60%,白痢占35%;未定的占5%。冶疗情况:用药2天治愈18头,用药3天治愈22头,未愈仔猪继续用复方穿琥宁注射液治疗1天后痊愈。
三、小结
1.复方穿琥宁注射液以0.1~0.2毫升/千克的剂量注射,2次/天,连用3天,能很好的控制猪大肠杆菌引起的肠炎腹泻,并且安全,治愈率高。
2.高剂量给药治疗组与中剂量给药治疗组相比,疗效差异不显著。
3.药物对照组、低剂量组疗效比中剂量组(0.1毫升/千克)差,并且差异很显著。因此推荐本品的常用量为0.1毫克/千克体重,2次/天,连用3天。
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