中国兽药典委员会办公室关于口蹄疫（A型）灭活疫苗（AF/72株）�?5个标准修订稿的公礹�/h1>

liwujian中国兽药典委员会办公�2015-10-05 11:02:00

药典办〓�/span>2015〔�/span>叶�/span>

中国兽药典委员会办公室关于口蹄疫＇�span lang="EN-US">A型）灭活疫苗＇�span lang="EN-US">AF/72株）筈�span lang="EN-US">15个标准修订稿的公礹�/span>

各相关机构、企业、组织：

根据《中国兽药典《�/span>2015年版编制方案＋�/span>2015年版兽药典三部部分增修订内容已经中国兽药典委员会生物制品专业委员会审查通过。现尅�/span>口蹄�?/span>＇�/span>A型）灭活疫苗＇�/span>AF/72株）筈�/span>15个兽药国家标准的修订稿予以公示，公示期为一个月。如有意见，请在公示期间及时向中国兽药典委员会办公室反馈、�/span>

聓�/span>糺�/span>人：杨京岙�/span>

联系电话９�/span>010-62103547

E-mail９�/span>yangjinglan@ivdc.org.cn

附件：口蹄疫＇�/span>A型）灭活疫苗＇�/span>AF/72株）筈�/span>15�?/span>标准修订稾�/span>

中国兽药典委员会办公宣�/span>

2015平�/span>3朇�/span>�?/span>

附件：口蹄疫＇�span lang="EN-US">A型）灭活疫苗＇�span lang="EN-US">AF/72株）筈�span lang="EN-US">15个标准修订稿

口蹄疫（A型）灭活疫苗＇�/span>AF/72株）

口蹄疫（Ｏ型、亚洱�/span>1型）二价灭活疫苗

猪口蹄疫＇�/span>O型）灭活疫苗＇�/span>OZK/93�?/span>+OR/80株或OS/99株）

猪链球菌病灭活疫苗（马链球菌兽疫亚种＋猪链球菋�/span>2型）

猪细小病毒病灭活疫苗（CP-99株）

鸡传染性支气管炎活疫苗＇�/span>H120株）

鸡传染性支气管炎活疫苗＇�/span>H52株）

鸡球虫病四价活疫苗（柔嫩艾美耳球�?/span>PTMZ�?/span>+毒害艾美耳球�?/span>PNHZ�?/span>+巨型艾美耳球�?/span>PMHY�?/span>+堆型艾美耳球�?/span>PAHY株）

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗＇�/span>La Sota戕�/span>B1�?/span>+H120株）

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗＇�/span>La Sota戕�/span>B1�?/span>+H52株）

猪伪狂犬病活疫苗＇�/span>HB-98株）

猪伪狂犬病活疫苗＇�/span>SA215株）

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC ELISA抗体检测试剂盒

口蹄�?/span>O型抗体液相阻�?/span>ELISA检测试剂盒

口蹄疫亚洱�/span>1型抗体阻�?/span>ELISA抗体检测试剂盒

口蹄疫（A型）灭活疫苗＇�/span>AF/72株）

Koutiyi＇�/span>A Xing（�/span>Miehuoyimiao＇�/span>AF/72 Zhu（�/span>

Foot and Mouth Disease＇�/span>Type A（�/span>Vaccine, Inactivated＇�/span>Strain AF/72（�/span>

本品系用牛源A型口蹄疫病毒AF/72株细胞毒，接秌�/span>BHK-21细胞，通过浓缩培养法培养，收获细胞培养物，经二乙烯亚胺＇�/span>BEI）灭活后，加矿物油佐剂混合乳化制成，用于预防牚�/span>A型口蹄疫、�/span>

【性状【�/span>外观粘滞性均匀乳剂、�/span>

剂型呈水包油包水型（W/O/W）。取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于清洁冷水表面，应呈云雾状扩散、�/span>

稳定�?/span>吸取疫苗10 ml加入离心管中，以3000 r/min离心15分钟，应不破乳，并且水相析出应不超过0.5 ml、�/span>

黏度按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>

』�/span>装量检�?/span>【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应符合规定、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【内毒素含量测定【�/span>吸取12 ml疫苗放入15 ml离心管中，置50±5ℂ�/span>水浴90分钟，然后在4ℂ�/span>条件下，�?/span>15000 g离心10分钟，取水相5.0 ml，按现行《中国兽药典》一部附录进行检验。每头份疫苗中内毒素含量应不高于50 EU、�/span>

【总蛋白含量测定【�/span>叕�/span>1瓶疫苗恢复至室温，在3�?/span>1.5 ml离心管中分别精确加入100 μl疫苗咋�/span>900 μl丙酮，充分混匀，室温放�?/span>10分钟，在4ℂ�/span>条件下，�?/span>15000 g离心15分钟。吸弃液相，沉淀物用400 μl丙酮洗涤2次，室温干燥�?/span>15分钟，加50 μl去离子水复溶后，挈�/span>附录《口蹄疫灭活疫苗总蛋白测定法《�/span>进行检验。每毫升疫苗总蛋白含量应不高亍�/span>500 μg、�/span>

【安全检验【�/span>＇�/span>1）用豚鼠检骋�/span>用体里�/span>350｝�/span>450 g的豚鼟�/span>2只，每只皮下注射疫苗2.0 ml。连续观寞�/span>7日，均应不出现因注射疫苗引起的死亡或明显的局部反应或全身反应、�/span>

＇�/span>2）用小鼠检骋�/span>用体里�/span>18｝�/span>22 g的小鼟�/span>5只，每只皮下注射疫苗0.5 ml。连续观寞�/span>7日，均应不出现因注射疫苗引起的死亡或明显的局部反应或全身反应、�/span>

＇�/span>3）用牛检骋�/span>用至尐�/span>6月龄的健康易感牛（口蹄疫细胞中和抗体滴度不高亍�/span>1∵�/span>8（�/span>3头，于每头牛舌上表面皮内刅�/span>20个点注射疫苗2.0 ml，每炸�/span>0.1 ml，逐日观察至少4日。之后，每头牛肌肉注射疫苖�/span>6.0 ml，继续逐日观察6日。均应不出现口蹄疫症状或明显的因注射疫苗引起的毒性反应、�/span>

【效力检验【�/span>用至尐�/span>6月龄的健康易感牛（口蹄疫细胞中和抗体滴度不高亍�/span>1∵�/span>8（�/span>15头，分为3组，每组5头。按使用剂量2.0 ml/头份，将待检疫苗分为1头份�?/span>1/3头份�?/span>1/9头份3个剂量组，每一剂量组分别颈部肌肉注尃�/span>5头牛。接秌�/span>21日后，将各组免疫牛和条件相同的对照牛2头，分别于舌上表面两侧分2点皮内注射制苗用同源A型口蹄疫病毒AF/72株，每点0.1 ml（共0.2 ml，含10^4.0ID₅₀）。连续观寞�/span>10日。对照牛均应至少3蹄出现水疱或溃疡。免疫牛仅在舌面出现水疱或溃疡，而其它部位无病变时判为保护，除舌面以外任一部位出现典型口蹄疫水疱或溃疡时判为不保护。根据免疫牛的保护数，按Reed-Muench法计算被检疫苗皃�/span>PD₅₀，每头份疫苗应至少含6 PD₅₀、�/span>

【汞类防腐剂残留量测定【�/span>按附彔�/span>进行测定，应符合规定、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防牚�/span>A型口蹄疫，免疫期丹�/span>6个月、�/span>

【用法与用量【�/span>肌肉注射＋�/span>6月龄以上成年牛每夳�/span>2.0 ml＋�/span>6月龄以下犊牛每头1.0 ml、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1）本品仅用于接种健康牛。接种前，应对牛进行检查，患病、瘦弱或临产畜不予注射、�/span>

＇�/span>2）在使用本品前应仔细检查，如发现疫苗瓶破损、封口不严、无标签或标签不清楚、疫苗有异物或变质、已过有效期或未在规定条件下保存的，均不能使用、�/span>

＇�/span>3）疫苗应冷藏运输，但不得冻结。运输和使用过程中应避免日光直射、�/span>

＇�/span>4）预防接种最好安排在气候适宜的季节，如需在炎热季节接种，应选在清晨或傍晚进行、�/span>

＇�/span>5）首次使用本疫苗的地区，应选择一定数量（�?/span>50头）的牛，进行小范围试用观察。确认无不良反应后，方可扩大接种面。接种后，应加强饲养管理并详细观察、�/span>

＇�/span>6）本疫苗适用于接种疫区、受威协区、安全区的牛。接种时，应从安全区到受威胁区，最后再接种疫区内安全群和受威胁群、�/span>

＇�/span>7）非疫区的牛，接种疫苖�/span>21日后，方可移动或调运、�/span>

＇�/span>8）接种怀孕母牛时，保定和注射动作应轻柔，以免影响胎儿，防止因粗暴操作导致母畜流产、�/span>

＇�/span>9）注射器具和注射部位应严格消毒。接种时，应执行常规无菌操作，一畜一针头、�/span>

＇�/span>10）注射疫苗时，进针应达到适当的深度（肌肉内）。勿注入皮下或脂肪层，以免影响免疫效果、�/span>

＇�/span>11）接种时，严格遵守操作规程，接种人员在更换衣服、鞋、帽和进行必要的消毒之后，方可参与疫苗的接种、�/span>

＇�/span>12）接种时，须有专人做好记录，写明省（区）、县、乡（镇）、自然村、畜主姓名、家畜种类、大小、性别、接种头数和未接种头数等。在安全区接种后，观寞�/span>7｝�/span>10日，并详细记载有关情况、�/span>

＇�/span>13）疫苗在使用前和使用过程中，均应充分摇匀。疫苗瓶开封后，限当日用完、�/span>

＇�/span>14）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

＇�/span>15）由于口蹄疫的特殊性，特别忠告：接种疫苗只是消灭和预防该病的多项措施之一，在接种疫苗的同时还应对疫区采取封锁、隔离、消毒等综合防治措施，对非疫区也应进行综合防治、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>50 ml/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>100 ml/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册，农业部公告1049号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.通用名称（含汉语拼音名称）：将“口蹄疫A型灭活疫苗（AF/72株）”改为“口蹄疫＇�/span>A型）灭活疫苗＇�/span>AF/72株）”。――规范名称、�/span>

2【性状】项：外观项删除对颜色的描述。将‛�/span>乳状涱�/span>“�/span>改为‛�/span>乳剂“�/span>；黏度项尅�/span>‛�/span>粘度“�/span>改为‛�/span>黏度“�/span>，将检测方法改丹�/span>‛�/span>按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>“�/span>；剂型中‛�/span>少许“�/span>改为‛�/span>少量“�/span>、�/span>―—�/span>规范文字；黏度项为本药典统一方法、�/span>

3.增加【装量检查】项―—�/span>本药典统一规定、�/span>

4.增加【内毒素含量测定】和【总蛋白含量测定】项、�/span>―—�/span>农办医〓�/span>2013〔�/span>32号、农业部公告2078号、�/span>

5.【安全检验】项：增加小标题，并规范了表述方式、�/span>

6.【效力检验】项：计算方法由“Karber泔�/span>“�/span>改为“Reed-Muench泔�/span>“�/span>、�/span>―�本药典统一规定计算方法、�/span>

7.将“【硫柳汞残留量测定】”改为“【汞类防腐剂残留量测定】”，并规范了表述方法。――规范文字、�/span>

8.规范了【注意事项】中第（14）条的文字表述、�/span>

9.规范文字，如规范【无菌检验】的表述方法；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>1 ml修约丹�/span>1.0 ml；将“小于等于”改为“不高于”等、�/span>

10.本标准发布后，原由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册、农业部公告1049号发布的‛�/span>口蹄�?/span>A型灭活疫苖�/span>(AF/72�?/span>)“�/span>标准废止、�/span>

口蹄疫（Ｏ型、亚洱�/span>1型）二价灭活疫苗

Koutiyi＇�/span>O Xing＋�/span>Yazhouyixing（�/span>Erjia Miehuoyimiao

Foot and Mouth Disease Bivalent＇�/span>TypeO and Asia-1（�/span>Vaccine, Inactivited

本品系用口蹄�?/span>O型病毒、亚洱�/span>1型病毒分别接秌�/span>BHK₂₁细胞培养，收获细胞培养物，分别经二乙烯亚胺（BEI）灭活后，加矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防牛、羊O型、亚洱�/span>1型口蹄疫、�/span>

【性状【�/span>外观略带粘滞性乳剂、�/span>

剂型水包油包水型。取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于清洁冷水表面，应呈云雾状扩散、�/span>

稳定�?/span>吸取疫苗10 ml加入离心管中，以3000 r/min离心15分钟，底部析出的水相应不超过0.5 ml、�/span>

黏度按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>

』�/span>装量检�?/span>【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应符合规定、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【内毒素含量测定【�/span>吸取12 ml疫苗放入15 ml离心管中，置50±5ℂ�/span>水浴90分钟，然后在4ℂ�/span>条件下，�?/span>15000 g离心10分钟，取水相5.0 ml，按现行《中国兽药典》一部附录进行检验。每头份疫苗中内毒素含量应不高于50 EU、�/span>

【总蛋白含量测定【�/span>叕�/span>1瓶疫苗恢复至室温，在3�?/span>1.5 ml离心管中分别精确加入100 μl疫苗咋�/span>900 μl丙酮，充分混匀，室温放�?/span>10分钟，在4ℂ�/span>条件下，�?/span>15000 g离心15分钟。吸弃液相，沉淀物用400 μl丙酮洗涤2次，室温干燥�?/span>15分钟，加50 μl去离子水复溶后，挈�/span>附录《口蹄疫灭活疫苗总蛋白测定法《�/span>进行检验。每毫升疫苗总蛋白含量应不高亍�/span>500 μg、�/span>

【安全检验【�/span>＇�/span>1）用豚鼠检骋�/span>用体里�/span>350｝�/span>450 g的豚鼟�/span>2只，每只皮下注射疫苗2.0 m1。观寞�/span>7日，均应不出现因注射疫苗引起的死亡或引起明显的局部反应或全身反应、�/span>

＇�/span>2）用小鼠检骋�/span>用体里�/span>18｝�/span>22 g小鼠5只每只皮下注射疫苖�/span>0.5 m1。观寞�/span>7日，均应不出现因注射疫苗引起的死亡或引起明显的局部反应或全身反应、�/span>

＇�/span>3）用牛检骋�/span>用至尐�/span>6月龄的健康易感牛（乳鼠中和抗体滴度不高于1∵�/span>4或细胞中和抗体滴度不高于1∵�/span>8戕�/span>ELISA抗体效价不高亍�/span>1∵�/span>16（�/span>3头，每头舌背面皮内分20点注射，每点0.1 m1，共2.0 m1疫苗，逐日观察，连�?/span>4日，之后每头牛颈部肌肉接秌�/span>6m1疫苗，连续观寞�/span>6日。均应不出现口蹄疫症状或由疫苗引起的明显毒性反应、�/span>

【效力检验【�/span>用至尐�/span>6月龄的健康易感牛（乳鼠中和抗体滴度不高于1∵�/span>4或细胞中和抗体滴度不高于1∵�/span>8戕�/span>ELISA抗体效价不高亍�/span>1∵�/span>16（�/span>30头，分为3组，每组10头。将待检疫苗分为1头份�?/span>1/3头份�?/span>1/9头份�?/span>3个剂量组，每一剂量组分别与颈部肌肉注射10头牛。接秌�/span>21｝�/span>28日，尅�/span>3个剂量中的牛各随机均分为O型组和亚洱�/span>1型组，分圈饲养、�/span>O型组，连同对照牛2头，每头牛舌上表面两侧分两点皮内注射牛源O型口蹄疫病毒强毒；亚洱�/span>1型组，连同对照牛2头，每头牛舌上表面两侧分两点皮内注射牛源亚洲1型口蹄疫病毒强毒，每点均丹�/span>0.1 m1（共0.2 m1，含10^4.0ID₅₀），连续观察10日，对照牛应3个以上蹄出现病变（水泡或溃疡）。免疫牛仅在舌面出现水泡或溃疡，而其他部位无病变时判为保护，除舌面以外任一部位出现典型口蹄疫病变（水泡或溃疡）时判为不保护、�/span>

根据免疫牛的保护数，挈�/span>Reed-Muench法计算被检疫苗皃�/span>PD₅₀，每头份疫苗应至少含牛口蹄疫O型、亚洱�/span>1型口蹄疫吃�/span>6�?/span>PD₅₀、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防牛、羊O型、亚洱�/span>1型口蹄疫。免疫期丹�/span>4｝�/span>6个月、�/span>

【用法与用量【�/span>肌肉注射，牛每头2.0 m1，羊每只1m1、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1（�/span>疫苗应冷藏运输（但不得冻结），并尽快运往使用地点。运输和使用过程中避免日光直接照射、�/span>

＇�/span>2）使用前应仔细检查疫苗。疫苗中若有其他异物、瓶体有裂纹或封口不严、破乳、变质者不得使用。使用时应将疫苗恢复至室温并充分摇匀。疫苗瓶开启后限当日用完、�/span>

＇�/span>3）本疫苗仅接种健康牛、羊。病畜、瘦弱、怀孕后期母畜及断奶前幼畜慎用、�/span>

＇�/span>4）严格遵守操作规程。注射器具和注射部位应严格消毒，每头（只）更换一次针头。曾接触过病畜人员，在更换衣、帽、鞋和进行必要消毒之后，方可参与疫苗注射、�/span>

＇�/span>5）疫苗对安全区、受威胁区、疫区牛、羊均可使用。疫苗应从安全区到受威胁区，最后再注射疫区内受威胁畜群。大量使用前，应先小试，在确认安全后，再逐渐扩大使用范围、�/span>

＇�/span>6）在非疫区，注苗名�/span>21日方可移动或调运、�/span>

＇�/span>7）在紧急防疫中，除用本品紧急接种外，还应同时采用其他综合防制措施、�/span>

＇�/span>8）个别牛出现严重过敏反应时，应及时使用肾上腺素等药物进行抢救，同时采用适当的辅助治疗措施、�/span>

＇�/span>9）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

＇�/span>10）注苗后，注射部位一般会出现肿胀，一过性体温反应，减食或停飞�/span>1｝�/span>2日，奶牛可出现一过性泌乳量减少，随着时间延长，症状逐渐减轻，直至消失。因品种、个体的差异，个别牛接种后可能出现急性过敏反应，如焦躁不安、呼吸加快、肌肉振颤、可视黏膜充血、瘤胃鼓气、鼻腔出血等，甚至因抢救不及时而死亠�/span>;少数怀孕母畜可能出现流产、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>20 m1/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>50 m1/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>100 m1/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由农业部公呉�/span>1042号发布的部颁标准。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.通用名称（含汉语拼音名称）：将“口蹄疫Ｏ型、亚洱�/span>I型二价灭活疫苗”改为“口蹄疫（Ｏ型、亚洱�/span>1型）二价灭活疫苗”；正文�?/span>‛�/span>亚洲I垊�/span>“�/span>均改丹�/span>‛�/span>亚洲1垊�/span>“�/span>、�/span>―—�/span>规范通用名称、�/span>

2.英文同�/span>“Foot and Mouth Disease BivalentVaccine, Inactivited＇�/span>TypeO and Asia-I（�/span>“�/span>改为“Foot and Mouth Disease Bivalent＇�/span>TypeO and Asia-1（�/span>Vaccine, Inactivited“�/span>、�/span>―—�/span>规范英文名称、�/span>

3.【性状】项：外观项删除对颜色的描述。将‛�/span>乳状涱�/span>“�/span>改为‛�/span>乳剂“�/span>；黏度项尅�/span>‛�/span>粘度“�/span>改为‛�/span>黏度“�/span>，将检测方法改丹�/span>‛�/span>按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>“�/span>；剂型中‛�/span>吸取疫苗“�/span>改为‛�/span>吸取少量疫苗“�/span>、�/span>―—�/span>规范文字；黏度项为本药典统一方法、�/span>

4.增加【装量检查】项―—�/span>本药典统一规定、�/span>

5.增加【内毒素含量测定】和【总蛋白含量测定】项、�/span>―—�/span>农办医〓�/span>2013〔�/span>32号、农业部公告2078号、�/span>

6.【安全检验】项：增加小标题，并规范了表述方式、�/span>

7.【效力检验】项：计算方法由“Karber泔�/span>“�/span>改为“Reed-Muench泔�/span>“�/span>；标准由3�?/span>PD₅₀改为6�?/span>PD₅₀、�/span>―—�/span>本药典统一规定计算方法；农办医〓�/span>2013〔�/span>32号规定提高标准、�/span>

8.删除【不良反应】项，将相关内容加入【注意事项】中、�/span>

9.规范了【注意事项】中第（9）条的文字表述、�/span>

10.规范文字，如规范【无菌检验】的表述方法；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>1 ml修约丹�/span>1.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

11.本标准发布后，原农业部公呉�/span>1042号发布的‛�/span>口蹄�?/span>O型、亚洱�/span>I型灭活疫苖�/span>�部颁标准废止、�/span>

猪口蹄疫＇�/span>O型）灭活疫苗＇�/span>OZK/93�?/span>+OR/80株或OS/99株）

Zhu Koutiyi＇�/span>O Xing（�/span>Miehuoyimiao＇�/span>OZK/93 Zhu + OR/80 Zhu Huo OS/99 Zhu（�/span>

Swine Foot and Mouth Disease Vaccine＇�/span>Type O＋�/span>OZK/93 Strain + OR/80 Strain or OS /99 Strain），Inactivated

本品系用猪口蹄疫O型病毑�/span>OZK/93株和OR/80株或OZK/93株和OS/99株分别接秌�/span>BHK21细胞培养，收获细胞培养物，经分别浓缩、二乙烯亚胺＇�/span>BEI）灭活后，加矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防猪O型口蹄疫、�/span>

【性状【�/span>外观略带粘滞性乳剂、�/span>

剂型水包油包水型。取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于清洁冷水表面，应呈云雾状扩散、�/span>

稳定�?/span>取疫苖�/span>10 ml加入离心管中，以3000 r/min离心15分钟，管底析出的水相应不超过0.5 ml、�/span>

黏度按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>

』�/span>装量检�?/span>【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应符合规定、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>扌�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【内毒素含量测定【�/span>吸取12 ml疫苗放入15 ml离心管中，置50±5ℂ�/span>水浴90分钟，然后在4ℂ�/span>条件下，�?/span>15000 g离心10分钟，取水相5.0 ml，按现行《中国兽药典》一部附录进行检验。每头份疫苗中内毒素含量应不高于50 EU、�/span>

【总蛋白含量测定【�/span>叕�/span>1瓶疫苗恢复至室温，在3�?/span>1.5 ml离心管中分别精确加入100 μl疫苗咋�/span>900 μl丙酮，充分混匀，室温放�?/span>10分钟，在4ℂ�/span>条件下，�?/span>15000 g离心15分钟。吸弃液相，沉淀物用400 μl丙酮洗涤2次，室温干燥�?/span>15分钟，加50 μl去离子水复溶后，挈�/span>附录《口蹄疫灭活疫苗总蛋白测定法《�/span>进行检验。每毫升疫苗总蛋白含量应不高亍�/span>500 μg、�/span>

【安全检验【�/span>＇�/span>1）用豚鼠检骋�/span>用体里�/span>350｝�/span>450 g豚鼠2只，每只皮下注射疫苗2.0 ml。连续观寞�/span>7日，均应不出现因注射疫苗引起的死亡或明显的不良反应或全身反应、�/span>

＇�/span>2）用小鼠检骋�/span>用体里�/span>18｝�/span>22 g小鼠5只，每只皮下注射疫苗0.5 ml。连续观寞�/span>7日，均应不出现因注射疫苗引起的死亡或明显的不良反应或全身反应、�/span>

＇�/span>3）用猪检骋�/span>�?/span>30｝�/span>40日龄的健康易感仔猪（细胞中和抗体滴度不高亍�/span>1∵�/span>8或乳鼠中和抗体滴�?/span>不高亍�/span>1∵�/span>4或液相阻�?/span>ELISA抗体滴度不高亍�/span>1∵�/span>8（�/span>2头，各两侧耳根后肌肉分点注尃�/span>2头份疫苗，逐日观察14日。均应不出现口蹄疫症状或明显的因注射疫苗引起的毒性反应、�/span>

【效力检验【�/span>用体里�/span>40 kg左右的健康易感架子猪（细胞中和抗体滴�?/span>�?∵�/span>8或乳鼠中和抗体滴�?/span>不高亍�/span>1∵�/span>4或液相阻�?/span>ELISA抗体滴度不高亍�/span>1∵�/span>8（�/span>30头，将待检疫苗分为1头份�?/span>1/3头份�?/span>1/9头份3个剂量组，每一剂量分别于耳根后肌肉注尃�/span>10头猪。接种后28日，每个剂量组分为两小组，每小组5头。两个攻毒组各设条件相同的对照猪2头，一组每头猪耳根后肌肉注尃�/span>1000�?/span>ID₅₀/2.0 ml OZK/93乳鼠毒；另一组每头猪耳根后肌肉注尃�/span>1000�?/span>ID₅₀/2.0 ml OR/80乳鼠毒。连续观寞�/span>10日。对照猪均应至少有一蹄出现水泡或溃疡。免疫猪出现任何口蹄疫症状即判为不保护。出现发病猪后要及时进行隔离。根据免疫猪的保护数，按Reed-Muench法计算被检疫苗皃�/span>PD₅₀。每头份疫苗对两个攻毒株的效力各应至少含6�?/span>PD₅₀、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防�?/span>O型口蹄疫。注射疫苗后2｝�/span>3周产生免疫力，免疫期丹�/span>6个月、�/span>

【用法与用量【�/span>耳根后部肌肉注射。体里�/span>10｝�/span>25 kg，每头接秌�/span>1.0 ml：�/span>25 kg以上，每头接秌�/span>2.0 ml、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1）疫苗应�?/span>2｝�/span>8ℂ�/span>下冷藏运输，不得冻结；运输和使用过程中，应避免日光直接照射；疫苗在使用前应充分摇匀、�/span>

＇�/span>2）注射前检查疫苗性状是否正常，并对猪只严格进行体态检查，对患病、瘦弱、临产前2个月及长途运输后的猪只暂不注射，待其正常后方可再注射。注射器械、吸苗操作及注射部位均应严格消毒，保证一头猪更换一次针头；注射时，入针深度适中，确实注入耳根后肌肉（剂量大时应考虑肌肉内多点注射法）、�/span>

＇�/span>3）注射工作必须由专业人员进行，防止打飞针。注苗人员要严把三关：猪的体态检查、消毒及注射深度、注后观察、�/span>

＇�/span>4）疫苗在疫区使用时，必须遵守先注安全区（群），然后受威胁区（群），最后疫区（群）的原则；并在注苗过程中做好环境卫生消毒工作，注苗15日后方可进行调运、�/span>

＇�/span>5）注射疫苗前必须对人员予以技术培训，严格遵守操作规程，曾接触过病猪的人员，在更换衣服、鞋、帽和进行必要的消毒之后，方可参与疫苗注射、�/span>25kg以下仔猪注苗时，应提倡肌肉内分点注射法、�/span>

＇�/span>6）疫苗在使用过程中做好各项登记记录工作、�/span>

＇�/span>7）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

＇�/span>8）预防接种只是降低、控制、消灭口蹄疫病的重要措施之一，注射疫苗的同时还应加强消毒、隔离、封锁等其它综合防制措施、�/span>

＇�/span>9）怀孕后期的母畜慎用、�/span>

＇�/span>10）注苗后，注射部位一般会出现肿胀，呼吸加快，体温升高，精神沉郁，减食或停飞�/span>1｝�/span>2日，一般在注苗3日后即可恢复正常。个别牲畜因品种、个体差异等可能会出现过敏反应（如呼吸急促，焦燥不安，肌肉震颤，呕吐，鼻孔出血，失去知觉等症状），甚至因抢救不及时而死亡。个别怀孕母猪可能导致流产。重者可用肾上腺素或地塞米松脱敏抢救、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>20ml/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>50ml/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>100ml/瓵�/span>

』�b>包装【�/span>＇�/span>1（�/span>250瓵�/span>/箰�/span>＇�/span>2（�/span>100瓵�/span>/箰�/span>＇�/span>3（�/span>50瓵�/span>/箰�/span>

【贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由农业部公呉�/span>1121号发布的部颁标准。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.通用名称（含汉语拼音名称）：将“猪口蹄�?/span>O型灭活疫苗（OZK/93�?/span>+OR/80株或OS/99株）”改为“猪口蹄疫（O型）灭活疫苗＇�/span>OZK/93�?/span>+OR/80株或OS/99株）”、�/span>―—�/span>规范通用名称、�/span>

2.【性状】项：外观项删除对颜色的描述。将‛�/span>乳状涱�/span>“�/span>改为‛�/span>乳剂“�/span>；黏度项尅�/span>‛�/span>粘度“�/span>改为‛�/span>黏度“�/span>，将检测方法改丹�/span>‛�/span>按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>“�/span>；剂型中‛�/span>少许“�/span>改为‛�/span>少量“�/span>、�/span>―—�/span>规范文字；黏度项为本药典统一方法、�/span>

3.增加【装量检查】项―—�/span>本药典统一规定、�/span>

4.增加【内毒素含量测定】和【总蛋白含量测定】项、�/span>―—�/span>农办医〓�/span>2013〔�/span>32号、农业部公告2078号、�/span>

5.【安全检验】项：增加小标题，并规范了表述方式、�/span>

6.【效力检验】项：标准由3�?/span>PD₅₀改为6�?/span>PD₅₀、�/span>―—�/span>农办医〓�/span>2013〔�/span>32号规定提高标准、�/span>

7.删除【不良反应】项，将相关内容加入【注意事项】中、�/span>

8.规范了的文字表述，如规范【无菌检验】、【注意事项】中第（7）条的表述方法；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>1 ml修约丹�/span>1.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

9.本标准发布后，原农业部公呉�/span>1121号发布的‛�/span>猪口蹄疫O型灭活疫苖�/span>(OZK/93�?/span>+OR/80株或OS/99�?/span>)�部颁标准废止、�/span>

猪链球菌病灭活疫苗（马链球菌兽疫亚种＋猪链球菋�/span>2型）

Zhulianqiujunbing Miehuoyimiao＇�/span>Malianqiujunshouyiyazhong +Zhulianqiujun Er Xing（�/span>

Swine Streptococcosis Diseases Vaccine＋�/span>Inactivated＇�/span>Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus + Streptococcus suistype 2（�/span>

本品系用致病性马链球菌兽疫亚秌�/span>ATCC 35246株和致病性猪链球菋�/span>2垊�/span>HA9801株分别经改良马丁肉汤培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活后，加入氢氧化铝胶制成。用于预防马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型感染引起的猪链球菌病、�/span>

【性状【�/span>静置后，底部有少量沉淀，上层为澄清液体，摇均后呈均匀混悬液、�/span>

』�/span>装量检�?/span>【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应符合规定、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【安全检验【�/span>将疫苗经肌肉注射21｝�/span>30日龄健康（猪链球菌抗体检测阴性）仔猪5头，每头注射4.0 ml，逐日观察15日。免疫猪均应无不良反应（注射名�/span>3日内试验猪体温，不得超过正常体温1ℂ�/span>，减食不超过1日）。应健活、�/span>

【效力检验【�/span>叕�/span>21｝�/span>30日龄健康（猪链球菌抗体检测阴性）仔猪10头，各肌肉注射疫苖�/span>2.0 ml＋�/span>15｝�/span>21日后。将5头免疫猪连同未免疫的对照�?/span>4头各静脉注射C74-63�?/span>1个致死量的强毒菌液；另５头免疫仔猪连同未免疫的对照猪4头各静脉注射ＨＡ9801�?/span>1个致死量的强毒菌液，观察15日。Ｃ74-63攻毒组的免疫猪应至少保护3头，对照组应全部死亡：�/span>HA9801株攻毒组的免疫猪应至少保护４头，对照组至少死亠�/span>3头。疫苗判为合格、�/span>

【甲醛和汞类防腐剂残留量测定【�/span>分别按附彔�/span>咋�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防C群马链球菌兽疫亚种和R群猪链球菋�/span>2型感染引起的猪链球菌病，适用于断奶仔猪、母猪。二次免疫后免疫期为6个月、�/span>

【用法与用量【�/span>肌肉注射，仔猪每次接秌�/span>2.0 ml，母猪每次接秌�/span>3.0 ml。仔猪在21｝�/span>28日龄首免，免疫后20｝�/span>30日后按同剂量进行�?/span>2次免疫。母猪在产前45日龄首免，产剌�/span>30日龄按同剂量进行�?/span>2次免疫、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1（�span>本品有分层属正常现象，用前应使疫苗恢复至室温，用时请摇匀，一经开瓶限4小时用完、�/span>

＇�/span>2（�span>疫苗切勿冻结、�/span>

＇�/span>3（�span>疫苗过期、变色或疫苗瓶破损，均不得使用、�/span>

＇�/span>4（�span>注射器械用前要灭菌处理，注射部位应严格消毒、�/span>

＇�/span>5（�span>仅用于接种健康猪、�/span>

＇�/span>6）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>20 ml／瓶＇�/span>2（�/span>100 ml／瓶

【贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由上海市畜牧兽医站、上海海利生物药品有限公司、南京农业大学申请注册，农业部公呉�/span>717号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.【性状】项：删除对颜色的描述；将“澄明”改为“澄清”。――规范文字、�/span>

2.增加【装量检查】项―—�/span>本药典统一规定、�/span>

3.将“【甲醛、硫柳汞残留量测定】”改为“【甲醛和汞类防腐剂残留量测定】“�/span>，并规范了表述方法。――规范文字、�/span>

4.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项，并规范了【注意事项】中第（6）条的文字表述、�/span>

5.规范文字，如规范【无菌检验】的表述方法；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>2 ml修约丹�/span>2.0 ml等、�/span>

6.本标准发布后，原由上海市畜牧兽医站、上海海利生物药品有限公司、南京农业大学申请注册、农业部公告717号发布的‛�/span>猪链球菌灭活疫苗（马链球菌兽疫亚秌�/span>+猪链球菌2型）“�/span>标准废止、�/span>

猪细小病毒病灭活疫苗＇�/span>CP-99�?/span>（�/span>

Zhu Xixiaobingdubing Miehuoyimiao＇�/span>CP-99 Zhu（�/span>

Swine Parvovirus Disease Vaccine＋�/span>Inactivated＇�/span>Strain CP-99（�/span>

本品系用猪细小病毑�/span>CP-99株，接种仔猪肾传代细胞（IBRS-2）培养，收获细胞培养液，经甲醛溶液灭活后，加入矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防猪细小病毒病、�/span>

【性状【�/span>均匀乳剂、�/span>

剂型为油包水型。取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于清洁冷水中，除第一滴呈云雾状扩散外，以后各滴均不扩散、�/span>

稳定�?/span>吸取疫苗10 ml加入离心管，�?/span>3000 r/min离心15分钟，管底析出水相应不超迆�/span>0.5 ml、�/span>

黏度按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>

』�/span>装量检�?/span>【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应符合规定、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【安全检验【�/span>＇�/span>1）用乳鼠检骋�/span>�?/span>2｝�/span>4日龄同窝乳鼠至少5只，各皮下肌肉注射疫苖�/span>0.1ml，逐日观察7日，应全部健活、�/span>

＇�/span>2）用猪检骋�/span>用断奶后1.5｝�/span>2月龄猪（猪瘟中和抗体阴性、猪细小病毒HI抗体效价低于1∵�/span>8（�/span>2头，各深部肌肉注射疫苖�/span>10 ml，逐日观察21日，应无因注射疫苗而引起的局部不良反应或全身不良反应、�/span>

【效力检验【�/span>用体重为350｝�/span>400 g的豚鼠（PPV HI抗体效价低于1∵�/span>8（�/span>4只，各肌肉注射疫苖�/span>0.5 ml＋�/span>28日后，连同对照豚鼟�/span>2只，采血分离血清，测定PPV HI抗体。对照豚鼠血清应为阴性，免疫豚鼠应全部出现抗体反应，HI效价应不低于1∵�/span>64、�/span>

【甲醛和汞类防腐剂残留量测定【�/span>按附彔�/span>咋�/span>页进行，应符合规定、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防猪细小病毒病。免疫期丹�/span>6个月、�/span>

【用法与用量【�/span>后备种母猪及公猪�?/span>6｝�/span>7月龄或配种前3｝�/span>4周注尃�/span>2次（间隔朞�/span>21日），每次深部肌肉注尃�/span>2.0 ml；经产母猪和成年公猪每年注射1次，每次深部肌肉注射2.0 ml、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1）疫苗使用前应认真检查，如出现破乳、变色、玻瓶有裂纹等均不可使用、�/span>

＇�/span>2）疫苗应在标明的有效期内使用。使用前必须摇匀，疫苗一旦开启应限当日用完、�/span>

＇�/span>3）切忌冻结和高温、�/span>

＇�/span>4）本疫苗在疫区或非疫区均可使用，不受季节限制、�/span>

＇�/span>5）怀孕母猪不宜使用、�/span>

＇�/span>6）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>4 ml/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>20 ml/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>40 ml/瓵�/span>＇�/span>4（�/span>50 ml/瓵�/span>＇�/span>5（�/span>100 ml/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

附注：猪细小病毒HI抗体检测方泔�/span>

1待检血清的处理取待检血渄�/span>100 μl＋�/span>56ℂ�/span>水浴灭活30分种后，加入25%高岭土悬涱�/span>300 μl，充分摇匀，置25ℂ�/span>上�/span>30分钟，其间振摆�/span>2｝�/span>3次，�?/span>10000 r/min离心5分钟，吸取上清，加入100 μl 20%豚鼠红细胞泥，振荡混匀后，37ℂ�/span>作用1小时＋�/span>6000 r/min离心5分种，即丹�/span>1∵�/span>4稀释后的血清样品、�/span>

21%豚鼠红细胞悬液制夆�/span>采取豚鼠血液与等量的阿氏液混合，用PBS＇�/span>0.1 mol/L pH倻�/span>7.2）反复洗涣�/span>3次，每次�?/span>1500 r/min离心10分钟，最后将沉积的红细胞配成1%豚鼠红细胞悬液、�/span>

325%高岭土制夆�/span>取高岭土25 g，加1.0 mol/L盐酸溶解，充分摇匀，离心弃上清，如此反复洗涣�/span>3次，用生理盐水配戏�/span>25%悬液，用5.0mol/L氢氧化钠谂�/span>pH值至7.1｝�/span>7.3，高压灭菌，2｝�/span>8ℂ�/span>保存、备用、�/span>

4血凝素工作液的配制

4.1凝集原凝集价测定采用96孔微量凝集板进行抗原凝集价测定，从第1孔至试验所需稀释倍数孔，每孔滴加稀释液25 μl，于�?/span>1孔滴加抗原（灭活皃�/span>BJ-2�?/span>PPV细胞培养物）25 μl，从�?/span>1孔开始作倍比稀释，然后从最高稀释度孔中弃去抗原溶液25μl，每孔再补充稀释液25 μl，充分震荡后，每孔滴功�/span>1%豚鼠红细胞悬涱�/span>25μl，并设不加样品的红细胞对照孔，充分震荡，�?/span>37ℂ�/span>上�/span>40分钟左右，当对照孔中的红细胞呈显著钮扣状沉淀时判定结果，以使红细胝�/span>100%凝集的最高稀释倍数为判定终点、�/span>

4.2血凝素工作液配制及检骋�/span>

4.2.14HA血凝素的配刵�/span>如果3.1项中抗原的凝集价＇�/span>HA）测定为1∵�/span>1024（举例）＋�/span>4个血凝单位（卲�/span>4 HA（�/span>=1024/4=256，即�?/span>PBS将凝集原稀釉�/span>256倍，使终浓度丹�/span>1∵�/span>256、�/span>

4.2.2检骋�/span>将配制的1∵�/span>256稀释液分别�?/span>1.0 ml的量加入PBS涱�/span>1.0 ml�?/span>2.0 ml�?/span>3.0 ml�?/span>4.0 ml�?/span>5.0 ml�?/span>6.0 ml中，使最终稀释度丹�/span>1∵�/span>2�?/span>1∵�/span>3�?/span>1∵�/span>4�?/span>1∵�/span>5�?/span>1∵�/span>6�?/span>1∵�/span>7。然后从每一稀释度中取25 μl，加�?/span>1%豚鼠红细胝�/span>25 μl，再加入25 μl PBS，充分震荡，37ℂ�/span>放置40分钟。如配制的抗原液刚好丹�/span>4 HA，则1∵�/span>4稀释度将给出凝集终点；如高于或低于4 HA，则应根据检验结果将血凝素稀释度做适当调整，使工作液确丹�/span>4 HA、�/span>

5血凝抑制（HI）试骋�/span>

5.1测定�?/span>96孔血凝反应板每孔滴加生理盐水25 μl，红细胞对照孔加�?/span>50 μl，随后于�?/span>1孔滴加经处理过的待检血渄�/span>25 μl，从�?/span>1孔开始作倍比稀释，至第10孔，弃去25 μl；除红细胞对照孔外，每孔加入4单位凝集抗原25 μl，充分震荡后，置37ℂ�/span>上�/span>1小时，每孔滴功�/span>1%豚鼠红细胞悬涱�/span>25 μl，充分震荡，�?/span>37ℂ�/span>上�/span>�?/span>40分钟，当对照孔中的红细胞呈显著钮扣状时判定、�/span>

5.2结果判定将反应板倾斜后判定结果。当阴性对照血渄�/span>HI效价不高亍�/span>1∵�/span>8，阳性对照血渄�/span>HI效价与已知结果相比，误差不高亍�/span>1个滴度时，试验成立。以使红细胞100%凝集抑制的最大血清稀释倍数作为被检血渄�/span>HI效价、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，原农业部公呉�/span>623号发布，由武汉中博生化有限公司申请注册。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.名称：增加毒株编号、�/span>

2.帽子：删除“强毒”――规范文字、�/span>

3.【性状】项：删除对颜色的描述；剂型项将“冷水”改为“清洁冷水”；黏度项将‛�/span>粘度“�/span>改为‛�/span>黏度“�/span>，将检测方法改丹�/span>‛�/span>按附彔�/span>页进行，应符合规定、�/span>“�/span>――――规范文字；黏度项为本药典统一方法、�/span>

4.增加【装量检查】项―—�/span>本药典统一规定、�/span>

5.【安全检验】项：增加了小标题、�/span>

6.将“【甲醛、硫柳汞残留量测定】”改为“【甲醛和汞类防腐剂残留量测定】“�/span>，并规范了表述方法。――规范文字、�/span>

7.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项，并在【注意事项】中规范增加了第＇�/span>6）条的文字表述、�/span>

8.增加‛�/span>附注：猪细小病毒HI抗体检测方泔�/span>�项、�/span>―—�/span>明确检测方法、�/span>

9.规范文字，如规范【无菌检验】的表述方法；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>2 ml修约丹�/span>2.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

10.本标准发布后，原由武汉中博生化有限公司申请注册，农业部公呉�/span>623号发布的‛�/span>猪细小病毒病灭活疫苗＇�/span>CP，�/span>99株）“�/span>标准废止、�/span>

鸡传染性支气管炎活疫苗＇�/span>H120株）

Ji Chuanranxingzhiqiguanyan Huoyimiao＇�/span>H120 Zhu（�/span>

Infectious Bronchitis Vaccine＋�/span>Live＇�/span>Strain H120（�/span>

本品系用鸡传染性支气管炎病毒弱毑�/span>H120株（CVCC AV1514）接秌�/span>SPF鸡胚，收获感染鸡胚液，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防鸡传染性支气管炎、�/span>

【性状【�/span>海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长。如果有菌生长，应进行杂菌计数和病原性鉴定（附录页）以及禽沙门氏菌检验（附录页），结果应符合规定。每羽份疫苗含非病原菌应不超迆�/span>1个、�/span>

【支原体检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无支原体生长、�/span>

【外源病毒检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无外源病毒污染、�/span>

【鉴别检验【�/span>将疫苗用灭菌生理盐水稀释至毎�/span>1.0 ml�?/span>1羽份，与等量抗鸡传染性支气管炎病毒特异性血清混合，�?/span>20｝�/span>25ℂ�/span>作用60分钟，通过尿囊腔途径接种9｝�/span>10日龄SPF鸡胚10枚，每胚0.2 ml。置37ℂ�/span>孵育24｝�/span>144小时，应不出现特异性死亡及鸡胚病变，并应至少有8只鸡胚健活、�/span>

【安全检验【�/span>�?/span>4｝�/span>7日龄SPF鸠�/span>20只，10只各滴鼻接种疫苗10羽份，另10只作对照。观寞�/span>10日，应全部健活，且无呼吸异常及神经症状。任何一组非特异性死亡鸡应不超过1只、�/span>

【效力检验【�/span>下列方法任择其一、�/span>

＇�/span>1）用鸡胚检骋�/span>按瓶签注明羽份，将疫苗用灭菌生理盐水稀释成毎�/span>0.1 ml�?/span>1羽份，再继续佛�/span>10倍系列稀释，叕�/span>3个适宜稀释度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1 ml，置37ℂ�/span>孵育144小时＋�/span>24小时以内死亡的鸡胚弃去不计，根据接种名�/span>24｝�/span>144小时的死胚及144小时的活胚中具有胎儿失水、蜷缩、发育小等特异性病痕的鸡胚总数计算EID₅₀。每羽份应不低于10^3.5EID₅₀、�/span>

＇�/span>2）用鸡检骋�/span>�?/span>l｝�/span>3日龄SPF鸠�/span>10只，每只滴鼻接种疫苗1羽份，接种后10｝�/span>14日，连同对照鸠�/span>10只，�?/span>10倍稀释的鸡传染性支气管炎病毒强毑�/span>M41株（CVCC AV1511）滴鼻，每只l｝�/span>2滴，连续观察10日。对照鸡应至少发痄�/span>8只，免疫鸡应至少保护8只、�/span>

【剩余水分测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【真空度测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

』�/span>作用与用逓�/span>【�/span>用于预防鸡传染性支气管炎。接种后5｝�/span>8日产生免疫力，免疫期丹�/span>2个月、�/span>

』�/span>用法与用野�/span>【�/span>滴鼻或饮水接种、�span>用于初生雏鸡的首免，不同品种鸡均可使用。至1｝�/span>2月龄时，须用H52疫苗进行加强接种、�/span>按瓶签注明羽份，用生理盐水、注射用水或水质良好的冷开水稀释、�/span>

滴鼻接种按瓶签注明羽份稀释，用滴管吸取疫苗，每羽1滴（�?/span>0.03 m1）、�/span>

饮水接种剂量加倍。饮用水量根据鸡龄大小而定，一�?/span>5｝�/span>10日龄5.0｝�/span>10 m1、�/span>

』�/span>注意事项【�/span>＇�/span>1）疫苗稀释后，应放冷暗处，限4小时内用完、�/span>

＇�/span>2）饮水接种时，忌用金属容器，饮水前应停水2｝�/span>4小时、�/span>

＇�/span>3）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>100羽份/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>250羽份/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>500羽份/瓵�/span>＇�/span>4（�/span>1000羽份/瓵�/span>＇�/span>5（�/span>2000羽份/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>，�/span>15ℂ�/span>以下保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

修订说明９�/span>

厞�/span>10年版《兽药典》标凅�/span>CVP3/2010/HYM/008�?/span>H120株部分的内容。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.选取H120株部分的内容、�/span>

2.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

3.【安全检验】项：删陣�/span>‛�/span>，否则可复检1次、�/span>� ―—�/span>重检的相关内容在‛�/span>兽用生物制品检验的一般规宙�/span>“�/span>中已有明确的统一规定、�/span>

4.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项、�/span>

5.本标准发布后，原10年版《兽药典《�/span>CVP3/2010/HYM/008号标准废止、�/span>

鸡传染性支气管炎活疫苗＇�/span>H52株）

Ji Chuanranxingzhiqiguanyan Huoyimiao＇�/span>H52 Zhu（�/span>

Infectious Bronchitis Vaccine＋�/span>Live＇�/span>Strain H52（�/span>

本品系用鸡传染性支气管炎病毒弱毑�/span>H52株（CVCC AV1513）接秌�/span>SPF鸡胚，收获感染鸡胚液，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防鸡传染性支气管炎、�/span>

【性状【�/span>海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长。如果有菌生长，应进行杂菌计数和病原性鉴定（附录页）以及禽沙门氏菌检验（附录页），结果应符合规定。每羽份疫苗含非病原菌应不超迆�/span>1个、�/span>

【支原体检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无支原体生长、�/span>

【外源病毒检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无外源病毒污染、�/span>

【鉴别检验【�/span>将疫苗用灭菌生理盐水稀释至毎�/span>1.0 ml�?/span>1羽份，与等量抗鸡传染性支气管炎病毒特异性血清混合，�?/span>20｝�/span>25ℂ�/span>作用60分钟，通过尿囊腔途径接种9｝�/span>10日龄SPF鸡胚10枚，每胚0.2 ml。置37ℂ�/span>孵育24｝�/span>144小时，应不出现特异性死亡及鸡胚病变，并应至少有8只鸡胚健活、�/span>

【安全检验【�/span>�?/span>25｝�/span>35日龄SPF鸠�/span>l0只，各滴鼻接种疫苖�/span>10羽份，观寞�/span>14日。应不出现任何症状、�/span>

【效力检验【�/span>下列方法任择其一、�/span>

＇�/span>1）用鸡胚检骋�/span>按瓶签注明羽份，将疫苗用灭菌生理盐水稀释成毎�/span>0.1 ml�?/span>1羽份，再继续佛�/span>10倍系列稀释，叕�/span>3个适宜稀释度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1 ml，置37ℂ�/span>孵育144小时＋�/span>24小时以内死亡的鸡胚弃去不计，根据接种名�/span>24｝�/span>144小时的死胚及144小时的活胚中具有胎儿失水、蜷缩、发育小等特异性病痕的鸡胚总数计算EID₅₀。每羽份应不低于10^3.5EID₅₀、�/span>

＇�/span>2）用鸡检骋�/span>�?/span>21日龄SPF鸠�/span>10只，每只滴鼻或气管接种疫苖�/span>1羽份，接种后14｝�/span>21日采血，分离血清，至少抽检5只鸡，分别测定其中和抗体效价（见附注），应不低于1∵�/span>8、�/span>

【剩余水分测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【真空度测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

』�/span>作用与用逓�/span>【�/span>用于预防鸡传染性支气管炎。接种后5｝�/span>8日产生免疫力，免疫期丹�/span>6个月、�/span>

』�/span>用法与用野�/span>【�/span>滴鼻或饮水接种。一�?span>专供1月龄以上的鸡进行加强接种，初生雏鸡不宜接种、�/span>按瓶签注明羽份，用生理盐水、注射用水或水质良好的冷开水稀释、�/span>

滴鼻接种按瓶签注明羽份稀释，用滴管吸取疫苗，每羽1滴（�?/span>0.03 m1）、�/span>

饮水接种剂量加倍。饮用水量根据鸡龄大小而定，一般为20｝�/span>30 ml、�/span>

』�/span>注意事项【�/span>＇�/span>1）疫苗稀释后，应放冷暗处，限4小时内用完、�/span>

＇�/span>2）饮水接种时，忌用金属容器，饮水前应停水2｝�/span>4小时、�/span>

＇�/span>3）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>100羽份/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>250羽份/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>500羽份/瓵�/span>＇�/span>4（�/span>1000羽份/瓵�/span>＇�/span>5（�/span>2000羽份/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>，�/span>15ℂ�/span>以下保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

附注：中和抗体效价测定方法和判定标准

将待测鸡血清作8倍稀释，不�/span>100 EID₅₀/0.1 ml的病毒液等体积混合，摇匀，于20｝�/span>25ℂ�/span>中和l小时，接秌�/span>SPF鸡胚6枚，每胚0.2 ml，同时设病毒对照和正常对照，�?/span>37ℂ�/span>继续孵育，观察至144小时。试验组应至尐�/span>5只健活，病毒对照组应至少50％出现典型病变或死亡，正常对照组应全部健活、�/span>

修订说明９�/span>

厞�/span>10年版《兽药典》标凅�/span>CVP3/2010/HYM/008�?/span>H52株部分的内容。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.选取H52株部分的内容、�/span>

2.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

3.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项、�/span>

4.本标准发布后，原10年版《兽药典《�/span>CVP3/2010/HYM/008号标准废止、�/span>

鸡球虫病四价活疫苗（柔嫩艾美耳球�?/span>PTMZ�?/span>+毒害艾美耳球�?/span>PNHZ�?/span>+巨型艾美耳球�?/span>PMHY�?/span>+堆型艾美耳球�?/span>PAHY株）

Ji qiuchongbing Sijia Huoyimiao (RounenaimeierqiuchongPTMZ Zhu＊�/span>DuhaiaimeierqiuchongPNHZ Zhu＊�/span>JuxingaimeierqiuchongPMHY Zhu＊�/span>DuixingaimeierqiuchongPAHYZhu)

Coccidiosis Quadrivalent Vaccine for Chickens＋�/span>Live (E.tenellaStrainPTMZ＋�/span>E.necatrixStrainPNHZ＋�/span>E.maximaStrainPMHYandE.acervulina StrainPAHY)

本品系用柔嫩艾美耳球虫梅州株早熟系（PTMZ株）、毒害艾美耳球虫贺州株早熟系（PNHZ株）、巨型艾美耳球虫河源株早熟系（PMHY株）和堆型艾美耳球虫河源株早熟系（PAHY株）分别经口接种健康鸡，收获粪便中的卵囊，离心洗涤，�?/span>1%氯胺T溶液中，在适宜温、湿度条件下孵育获得孢子化卵囊，按适当比例混合制成，用于预防鸡球虫病、�/span>

』�/span>性状【�/span>均匀液体，静置后底部有少量沉淀、�/span>

』�/span>无菌检骋�/span>【�/span>按附彔�/span>进行检验，应无菌生长、�/span>

』�/span>卵囊计数【�/span>用血球计数板进行卵囊计数。每羽份疫苗的孢子化卵囊数应丹�/span>1100�?/span>±10%、�/span>

』�/span>安全检骋�/span>【�/span>�?/span>3｝�/span>7日龄SPF鸠�/span>20只，其中10只各经口接种疫苗10羽份，另10只不接种作为对照。分别置隔离器中饲养，观寞�/span>7日，应不出现由疫苗引起的球虫病症状和死亡。剖检所有鸡，检查每只鸡的球虫适宜寄生部位（柔嫩艾美耳球虫检查盲肠；毒害艾美耳球虫检查小肠中段；巨型艾美耳球虫检查小肠中段；堆型艾美耳球虫检查十二指肠）的病变并记分（病变记分标准见附注1）。免疫鸡十二指肠、小肠中段、盲肠病变记分均应不高于+1.0分；对照鸡相应部位均应无病变、�/span>

』�/span>效力检骋�/span>【�/span>�?/span>3｝�/span>7日龄SPF鸠�/span>20只，其中10只鸡各经口接种疫苖�/span>1羽份，另10只不接种作为对照组。将两组鸡分别在相同条件下隔离饲养（垫料上饲养）。接种后21日，每只鸡口服攻击柔嫩艾美耳球虫梅州株＇�/span>TMZ株）、毒害艾美耳球虫贺州株＇�/span>NHZ株）、巨型艾美耳球虫河源株＇�/span>MHY株）、堆型艾美耳球虫河源株＇�/span>AHY株）强毒孢子化混合卵囊（含堆型艾美耳球虫河源株10万个，其仕�/span>3种球虫各5万个），观察5｝�/span>7日，剖检所有鸡＋�/span>检查每只鸡的球虫适宜寄生部位的病变并记分、�/span>对照组至尐�/span>9只鸡十二指肠、小肠中段、盲肠病变记分均应不低于+3.0分；免疫组至尐�/span>8只鸡十二指肠、小肠中段、盲肠病变记分均应不高于+1.0分、�/span>

』�/span>作用与用逓�/span>【�/span>用于预防鸡球虫病。接种后14日开始产生免疫力，免疫力可持续至饲养期末、�/span>

』�/span>用法与用野�/span>【�/span>＇�/span>1）免疫接种程庎�/span>用于3｝�/span>7日龄鸡饮水免疫、�/span>

＇�/span>2（�/span>接种方法及剂量　饮水接种。每鸠�/span>1羽份。每瓵�/span>1000羽份（或2000羽份）的疫苗兑水6 L（或12 L），加入1瓵�/span>50 g/瓶（戕�/span>1瓵�/span>100 g/瓶）的球虫疫苗助悬剂，配成混悬液。供1000羽（戕�/span>2000羽）雏鸡自由饮用，平均每羽鸡饮用6.0 ml球虫疫苗混悬液，�?/span>4｝�/span>6小时饮用完毕、�/span>

』�/span>注意事项【�/span>＇�/span>1）本品严禁结冻或在靠近热源的地方存放、�/span>

＇�/span>2）仅用于接种健康雏鸡，使用时应充分摇匀、�/span>

＇�/span>3）对饲料中药物使用的要求严禁在饲料中添加任何抗球虫药物、�/span>

＇�/span>4）对扩栏与垫料管理的要求⑟�/span>建议不要逐日扩栏，接种球虫疫苗后�?/span>7日，将育雏面�?/span>‛�/span>一步到佌�/span>“�/span>地扩大到免疫接种后第17日所需的育雏面积，以利于鸡群获得均匀的重复感染机会；①�/span>接种球虫疫苗后的�?/span>8｝�/span>16日内不可更换垫料、�/span>②�/span>垫料的湿度以25%｝�/span>30%（用手抓起一把垫料时，手心有微潮的感觉）为宜、�/span>

＇�/span>5）做好免疫抑制性疾病的预防和控制工佛�/span>许多免疫抑制性疾病如传染性法氏囊病、马立克氏病、霉菌毒素中毒等，会严重影响抗球虫免疫力的建立，加重疫苗的反应。应避免这些疾病对疫苗免疫效果的干扰、�/span>

＇�/span>6）减少应激因素的影哌�/span>免疫接种球虫疫苗后的�?/span>12｝�/span>14日，是疫苗反应较强的阶段，在此期间应尽量避免断喙、注射其它疫苗和迁移鸡群、�/span>

＇�/span>7）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

＇�/span>8）接种疫苗后12｝�/span>14日，个别鸡只可能会出现拉血粪的现象，不需用药。如果出现严重血粪或球虫病死鸡，则用磺胺喹f啉或磺胺二甲嘧啶按推荐剂量投�?/span>1｝�/span>2日，即可控制、�/span>

』�/span>规格【�/span>＇�/span>1（�/span>1000羽份/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>2000羽份/瓵�/span>

』�/span>贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>下保存，有效期为7个月、�/span>

附注９�/span>1　病变记分标准

1.1柔嫩艾美耳球虫引起的病变感染后第5｝�/span>7日之间剖检盲肠（两侧盲肠病变不一致时，以严重一侧为准）、�/span>

0刅�/span>无肉眼可见病变、�/span>

+1刅�/span>盲肠内容物正常，肠壁黏膜面可见少量散在出血点，或出血斑、�/span>

+2刅�/span>盲肠内容物带血，肠壁黏膜面出血点或出血斑数量较为密集，肠壁增厚、�/span>

+3刅�/span>盲肠轻度肿大，肠腔内没有正常的盲肠粪便，肠道黏膜增厚，盲肠腔内充满暗红色血液或出现盲肠芯（呈灰白色干酪样香蕉型块状物）、�/span>

+4刅�/span>盲肠高度肿大，盲肠腔内没有盲肠粪或已被包在肠芯中，肠腔内充满坏死凝血块和盲肠黏膜碎片、�/span>因本球虫致死的鸡记为+4分、�/span>

1.2毒害艾美耳球虫引起的病变感染后第5｝�/span>7日之间剖检小肠、�/span>

0刅�/span>无肉眼可见病变、�/span>

+1刅�/span>小肠中段浆膜面可见针尖状大小散在的出血点和白点，肠腔内可见少量橘红色内容物，肠壁略增厚、�/span>

+2刅�/span>肠壁增厚，浆膜面有大量的出血点和白点，小肠中段出现轻度胀气，肠腔局部混有凝血块、�/span>

+3刅�/span>浆膜面布满红色出血点和白点，肠腔鼓气扩张，肠壁明显增厚，整个肠内容物中含有多量的血凝块和坏死脱落的上皮组织，肠黏膜面粗糙，没有正常的肠内容物、�/span>

+4刅�/span>小肠中段高度肿胀，肠段出现萎缩、明显缩短，病变延伸至十二指肠和小肠后段，小肠内容物中含有酱油色或棕色粘液，肠道黏膜出血，坏死、�/span>因本球虫致死的鸡记为+4分、�/span>

1.3巨型艾美耳球虫引起的病变感染后第5｝�/span>7日之间剖检小肠、�/span>

0刅�/span>无肉眼可见病变、�/span>

+1刅�/span>小肠中段黏膜面可见较小的出血点，肠腔中有少量桔黄色粘液、�/span>

+2刅�/span>小肠中段出现轻度胀气，浆膜面可见许多出血点，延伸至十二指肠，肠腔内可见大量的桔黄色粘液、�/span>

+3刅�/span>肠管扩张，没有正常的肠内容物，肠内容物混有血凝块和桔黄色粘液，肠壁变薄，黏膜面粗糙、�/span>

+4刅�/span>肠管肿胀，肠内容物粘稠，呈红棕色，并混有大量血凝块，呈淡洗肉水色，肠黏膜充血、出血、脱落、�/span>因本球虫致死的鸡记为+4分、�/span>

1.4堆型艾美耳球虫引起的病变感染后第5｝�/span>7日之间剖检十二指肠、�/span>

0刅�/span>无肉眼可见病变、�/span>

+1刅�/span>十二指肠浆膜面和黏膜面均可见有散在横纹状白斑，横向排列，外观呈梯形、�/span>

+2刅�/span>病变较为密集，但未融合，十二指肠黏膜上覆以横向排列的横纹状白斑，外观呈梯状，病变延伸至空肠，消化道内容物较稀薄，肠黏膜增厚、�/span>

+3刅�/span>十二指肠黏膜面可见密集的灰白色病灶，病变延伸至卵黄囊蒂处，肠道苍白，肠腔内有多量水分，内容物呈水样液体、�/span>

+4刅�/span>十二指肠黏膜面呈浅灰色，横纹状白斑完全融合，肠腔内充满奶油状渗出物，肠壁增厚,因本球虫致死的鸡记为+4分、�/span>

2球虫疫苗助悬剂质量标凅�/span>

�?span>品系用低聚果糖与适宜辅料等配制而成，用于配制球虫疫苗混悬液、�/span>

【性状【�/span>类白色或淡黄色粉末、�/span>

【干燥失重【�/span>取本品，�?/span>105ℂ�/span>干燥至恒重，减失重量不得超过10.0%、�/span>

【助悬效果【�/span>尅�/span>5瓶（1000羽份/瓵�/span>）球虫疫苗兑氳�/span>1000 ml，加入本�?/span>8.33 g，配成球虫疫苗混悬液，置2000 ml烧杯中，静置。分别于配好球虫疫苗混悬液后皃�/span>0小时�?/span>4小时咋�/span>8小时，用移液枪在烧杯皃�/span>900 ml�?/span>600 ml�?/span>300 ml刻度处（亦即球虫疫苗混悬液的上、中、下三层）分别吸叕�/span>10 ?l球虫疫苗混悬液，�?/span>10×10倍显微镜下计算卵囊数，每处各取样3次，将每处所取的3个样品的卵囊数取平均值，�?/span>0小时3个部位混悬液的卵囊平均数为基数，4小时咋�/span>8小时仍�/span>900 ml�?/span>600 ml�?/span>300 ml刻度处分别吸取的球虫疫苗混悬液的卵囊平均数与基数相差均应小于10%，表明卵囊既不上浮也不沉降，符合混悬要求、�/span>

【作用与用途【�/span>助悬剂。用于提高球虫疫苗混悬液的粘稠度，使球虫疫苗卵囊在混悬液中能较长时间保持上下均匀分布，从而保证球虫疫苗在使用时达到均匀免疫的效果、�/span>

【用法与用量【�/span>混饮，每6 L球虫疫苗溶液添加本品50 g、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>50 g/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>100 g/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>遮光，密闭，室温下保存，有效期为24个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由佛山市正典生物技术有限公司申请注册，农业部公呉�/span>875号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

2.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项，并在【注意事项】中规范增加了第＇�/span>7）条的文字表述、�/span>

3.删除【不良反应】项，将相关内容加入【注意事项】中、�/span>

4.规范文字，如在数字和单位之间加空一格；尅�/span>6 ml修约丹�/span>6.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

5.本标准发布后，原由佛山市正典生物技术有限公司申请注册、农业部公告875号发布的‛�/span>鸡球虫病四价活疫苗（柔嫩艾美耳球�?/span>PTMZ�?/span>+毒害艾美耳球�?/span>PNHZ�?/span>+巨型艾美耳球�?/span>PMHY�?/span>+堆型艾美耳球�?/span>PAHY株）“�/span>标准废止、�/span>

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗＇�/span>La Sota戕�/span>B1�?/span>+H120株）

Ji Xinchengyi＋�/span>Chuanranxingzhiqiguanyan Erlian Huoyimiao＇�/span>La Sota huo B1 Zhu + H120 Zhu（�/span>

Combined Newcastle Disease and Infectious Bronchitis Vaccine＋�/span>Live＇�/span>StrainLa Sota or B1 +Strain H120（�/span>

本品系用鸡新城疫病毒La Sota株（CVCC AV1615）或HB1株（CVCC AV1613）和传染性支气管炎病毑�/span>H120株（CVCC AV1514）接秌�/span>SPF鸡胚培养，收获感染鸡胚尿囊液，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎、�/span>

【性状【�/span>海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长。如果有菌生长，应进行杂菌计数和病原性鉴定（附录页）、禽沙门氏菌检验（附录页），应符合规定。每羽份含非病原菌应不超迆�/span>1个、�/span>

【支原体检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无支原体生长、�/span>

【外源病毒检验【�/span>按附彔�/span>顴�/span>进行检验，应无外源病毒污染、�/span>

【鉴别检验【�/span>将疫苗用灭菌生理盐水稀释至毎�/span>1.0 ml�?/span>1羽份，分别与等量抗鸡新城疫、传染性支气管炎病毒特异性血清混合，置室温作�?/span>60分钟，尿囊腔内接秌�/span>10日龄SPF鸡胚10枚，每胚0.2 ml。置37ℂ�/span>下孵肱�/span>144小时＋�/span>24｝�/span>144小时内，应不引起特异性死亡及鸡胚病变，并至少月�/span>8枚鸡胚健活，对鸡胚液作红细胞凝集试验，应为阴性、�/span>

【安全检验【�/span>将疫苗用生理盐水稀释，�?/span>4｝�/span>7日龄SPF鸠�/span>20只，10只各滴鼻接种0.05 ml（含10羽份），�?/span>10只作对照，观寞�/span>14日，应全部健活。如果有非特异性死亡，免疫组与对照组均应不超过1只、�/span>

【效力检验【�/span>下列方法任择其一、�/span>

＇�/span>1）用鸡胚检骋�/span>将疫苗用灭菌生理盐水稀释至1羽份/0.5 ml，分别装�?/span>2支试管中，每�?/span>l.0 ml。第1管中加入等量抗鸡新城疫病毒特异性血清，�?/span>2管中加入等量抗鸡传染性支气管炎病毒特异性血清。置室温中和l小时（中间摇1次），此时的疫苗病毒含量丹�/span>0.1羽份/0.1 ml，即10^{，�/span>1}。对�?/span>1管继续进衋�/span>10倍系列稀释，叕�/span>3个适宜稀释度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1 ml，置37ℂ�/span>孵育144小时，根据接种后24｝�/span>144小时内死胚及144小时时存活的鸡胚中出现失水、蜷缩、发育小（接种胎儿比对照最轻胎儿重量低2g以上）等特异性病变鸡胚的总和计算EID₅₀，每羽份应不低于10^3.5EID₅₀，传染性支气管炎部分判为合格。对�?/span>2管继续进衋�/span>10倍系列稀释，叕�/span>3个适宜稀释度，各尿囊腔内接种鸡胚5枚，每胚0.1 ml，置37ℂ�/span>孵育120小时，接种后48小时以内死亡的鸡胚不计，随时取出48｝�/span>120小时内死亡的鸡胚，收获鸡胚液，同稀释度的鸡胚液等量混合，至120小时取出活胚，逐个收获胚液，分别测定血凝价＋�/span>1∵�/span>160（微量法1∵�/span>128）以上判为感染，计算EID₅₀，鸡新城疫部分每羽份应不低于10^6.0EID₅₀、�/span>

＇�/span>2）用鸡检骋�/span>鸡新城疫部分＋�span>�?/span>30｝�/span>60日龄SPF鸠�/span>15只，10只各滴鼻接种疫苗0.01羽份，另5只作对照。接秌�/span>14日后，每只鸡各肌肉注射鸡新城疫病毒强毒北京株＇�/span>CVCC AV1611（�/span>0.5 ml＇�/span>10^4.0ELD₅₀），观察14日。对照鸡应全部死亡，免疫鸡应至少保护9只、�/span>鸡传染性支气管炎部分，�?/span>l｝�/span>3日龄SPF鸠�/span>10只，每只滴鼻接种疫苗1羽份，接种后10｝�/span>14日，连同对照鸠�/span>10只，�?/span>10倍稀释的鸡传染性支气管炎病毒强毑�/span>M41株（CVCC AV1511）滴鼻，每只l｝�/span>2滴，连续观察10日。对照鸡应至少发痄�/span>8只，免疫鸡应至少保护8只、�/span>

【剩余水分测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【真空度测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

』�/span>作用与用逓�/span>【�/span>用于预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎、�/span>

』�/span>用法与用野�/span>【�/span>滴鼻或饮水接种、�/span>HB1-H120二联苗适用亍�/span>1日龄以上的鸡：�/span>La Sota-H120二联苗适用亍�/span>7日龄以上的鸡。按瓶签注明羽份，用生理盐水、注射用水或水质良好的冷开水稀释疫苗、�/span>

滴鼻接种每只l滴（�?/span>0.03 ml）、�/span>

饮水接种剂量加倍。饮用水量根据鸡龄大小而定，一�?/span>5｝�/span>10日龄5｝�/span>10 ml�?/span>20｝�/span>30日龄10｝�/span>20 m1、成鸠�/span>20｝�/span>30 ml、�/span>

』�/span>注意事项【�/span>＇�/span>1）稀释后，应放冷暗处，限4小时内用完、�/span>

＇�/span>2）饮水接种时，忌用金属容器，饮用前应至少停水2｝�/span>4个小时、�/span>

＇�/span>3）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>100羽份/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>250羽份/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>500羽份/瓵�/span>＇�/span>4（�/span>1000羽份/瓵�/span>＇�/span>5（�/span>2000羽份/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>，�/span>15ℂ�/span>以下保存，有效期丹�/span>18个月、�/span>

修订说明９�/span>

厞�/span>10年版《兽药典》标凅�/span>CVP3/2010/HYM/016中新城疫部分和传染性支气管炍�/span>H120株部分的内容。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.选取新城疫部分和传染性支气管炍�/span>H120株部分的内容、�/span>

2.帽子：将“用于预防鸡新城疫和传染性支气管炎”改为“用于预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎”。――规范文字、�/span>

3.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

4.【安全检验】项：删陣�/span>‛�/span>否则可重检1次，重检后应符合规定、�/span>� ―—�/span>重检的相关内容在‛�/span>兽用生物制品检验的一般规宙�/span>“�/span>中已有明确的统一规定、�/span>

5.【效力检验】（2）用鸡检验项：将“鸡新城疫部分同新城疫活疫苗。鸡传染性支气管炎部分同鸡传染性支气管炎活疫苗＇�/span>H120株）。”改为具体的操作方法、�/span>

6.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项、�/span>

7.本标准发布后，原10年版《兽药典《�/span>CVP3/2010/HYM/016号标准废止、�/span>

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗＇�/span>La Sota戕�/span>B1�?/span>+H52株）

Ji Xinchengyi＋�/span>Chuanranxingzhiqiguanyan Erlian Huoyimiao＇�/span>La Sota huo B1 Zhu + H52Zhu（�/span>

Combined Newcastle Disease and Infectious Bronchitis Vaccine＋�/span>Live＇�/span>StrainLa Sota or B1 +Strain H52（�/span>

本品系用鸡新城疫病毒La Sota株（CVCC AV1615）或HB1株（CVCC AV1613）和传染性支气管炎病毑�/span>H52株（CVCC AV1513）接秌�/span>SPF鸡胚培养，收获感染鸡胚尿囊液，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎、�/span>

【性状【�/span>海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长。如果有菌生长，应进行杂菌计数和病原性鉴定（附录页）、禽沙门氏菌检验（附录页），应符合规定。每羽份含非病原菌应不超迆�/span>1个、�/span>

【支原体检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无支原体生长、�/span>

【外源病毒检验【�/span>按附彔�/span>顴�/span>进行检验，应无外源病毒污染、�/span>

【鉴别检验【�/span>将疫苗用灭菌生理盐水稀释至毎�/span>1.0 ml�?/span>1羽份，分别与等量抗鸡新城疫、传染性支气管炎病毒特异性血清混合，置室温作�?/span>60分钟，尿囊腔内接秌�/span>10日龄SPF鸡胚10枚，每胚0.2 ml。置37ℂ�/span>下孵肱�/span>144小时＋�/span>24｝�/span>144小时内，应不引起特异性死亡及鸡胚病变，并至少月�/span>8枚鸡胚健活，对鸡胚液作红细胞凝集试验，应为阴性、�/span>

【安全检验【�/span>�?/span>2l｝�/span>30日龄SPF鸠�/span>10只，每只滴鼻接种疫苗0.05 ml（含l0羽份），观察14日，应不出现任何临床症状和死亡、�/span>

【效力检验【�/span>下列方法任择其一、�/span>

＇�/span>1）用鸡胚检骋�/span>将疫苗用灭菌生理盐水稀释至1羽份/0.5 ml，分别装�?/span>2支试管中，每�?/span>l.0 ml。第1管中加入等量抗鸡新城疫病毒特异性血清，�?/span>2管中加入等量抗鸡传染性支气管炎病毒特异性血清。置室温中和l小时（中间摇1次），此时的疫苗病毒含量丹�/span>0.1羽份/0.1 ml，即10^{，�/span>1}。对�?/span>1管继续进衋�/span>10倍系列稀释，叕�/span>3个适宜稀释度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1 ml，置37ℂ�/span>孵育144小时，根据接种后24｝�/span>144小时内死胚及144小时时存活的鸡胚中出现失水、蜷缩、发育小（接种胎儿比对照最轻胎儿重量低2g以上）等特异性病变鸡胚的总和计算EID₅₀，每羽份应不低于10^3.5EID₅₀，传染性支气管炎部分判为合格。对�?/span>2管继续进衋�/span>10倍系列稀释，叕�/span>3个适宜稀释度，各尿囊腔内接种鸡胚5枚，每胚0.1 ml，置37ℂ�/span>孵育120小时，接种后48小时以内死亡的鸡胚不计，随时取出48｝�/span>120小时内死亡的鸡胚，收获鸡胚液，同稀释度的鸡胚液等量混合，至120小时取出活胚，逐个收获胚液，分别测定血凝价＋�/span>1∵�/span>160（微量法1∵�/span>128）以上判为感染，计算EID₅₀，鸡新城疫部分每羽份应不低于10^6.0EID₅₀、�/span>

＇�/span>2）用鸡检骋�/span>鸡新城疫部分＋�span>�?/span>30｝�/span>60日龄SPF鸠�/span>15只，10只各滴鼻接种疫苗0.01羽份，另5只作对照。接秌�/span>14日后，每只鸡各肌肉注射鸡新城疫病毒强毒北京株＇�/span>CVCC AV1611（�/span>0.5 ml＇�/span>10^4.0ELD₅₀），观察14日。对照鸡应全部死亡，免疫鸡应至少保护9只、�/span>鸡传染性支气管炎部分，�?/span>21日龄SPF鸠�/span>10只，每只滴鼻或气管接种疫苖�/span>1羽份，接种后14｝�/span>21日采血，分离血清，至少抽检5只鸡，分别测定其中和抗体效价（见附注），应不低于1∵�/span>8、�/span>

【剩余水分测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【真空度测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

』�/span>作用与用逓�/span>【�/span>用于预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎、�/span>

』�/span>用法与用野�/span>【�/span>滴鼻或饮水接种。适用亍�/span>21日龄以上的鸡。按瓶签注明羽份，用生理盐水、注射用水或水质良好的冷开水稀释疫苗、�/span>

滴鼻接种每只l滴（�?/span>0.03 ml）、�/span>

饮水接种剂量加倍。其饮水量根据鸡龄大小而定，一�?/span>20｝�/span>30日龄10｝�/span>20 m1、成鸠�/span>20｝�/span>30 ml、�/span>

』�/span>注意事项【�/span>＇�/span>1）稀释后，应放冷暗处，限4小时内用完、�/span>

＇�/span>2）饮水接种时，忌用金属容器，饮用前应至少停水2｝�/span>4个小时、�/span>

＇�/span>3）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>100羽份/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>250羽份/瓵�/span>＇�/span>3（�/span>500羽份/瓵�/span>＇�/span>4（�/span>1000羽份/瓵�/span>＇�/span>5（�/span>2000羽份/瓵�/span>

【贮藏与有效期【�/span>，�/span>15ℂ�/span>以下保存，有效期丹�/span>18个月、�/span>

附注：中和抗体效价测定方法和判定标准

将待测鸡血清作8倍稀释，不�/span>100 EID₅₀/0.1 ml的病毒液等体积混合，摇匀，于20｝�/span>25ℂ�/span>中和l小时，接秌�/span>SPF鸡胚6枚，每胚0.2 ml，同时设病毒对照和正常对照，�?/span>37ℂ�/span>继续孵育，观察至144小时。试验组应至尐�/span>5只健活，病毒对照组应至少50％出现典型病变或死亡，正常对照组应全部健活、�/span>

修订说明９�/span>

厞�/span>10年版《兽药典》标凅�/span>CVP3/2010/HYM/016中新城疫部分和传染性支气管炍�/span>H52株部分的内容。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.选取新城疫部分和传染性支气管炍�/span>H52株部分的内容、�/span>

2.帽子：将“用于预防鸡新城疫和传染性支气管炎”改为“用于预防鸡新城疫和鸡传染性支气管炎”。――规范文字、�/span>

3.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

4.【效力检验】项：将“同鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗＇�/span>La Sota戕�/span>HB1+H120）”和“鸡新城疫部分同新城疫活疫苗。鸡传染性支气管炎部分同鸡传染性支气管炎活疫苗＇�/span>H52株）。”改为具体的操作方法、�/span>

5.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项、�/span>

6.本标准发布后，原10年版《兽药典《�/span>CVP3/2010/HYM/016号标准废止、�/span>

猪伪狂犬病活疫苗＇�/span>HB-98株）

Zhu Weikuangquanbing Huoyimiao＇�/span>HB-98 Zhu（�/span>

Swine Pseudorabies Vaccine, Live＇�/span>HB-98 Strain（�/span>

本品系用双基因（TK�?/span>gG）缺失的伪狂犬病毑�/span>HB-98株接秌�/span>SPF鸡胚成纤维细胞培养，收获细胞培养物，加适宜的保护剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防猪伪狂犬病、�/span>

【性状【�/span>海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【支原体检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无支原体生长、�/span>

【鉴别检验【�/span>�?/span>DMEM生长液将疫苗稀释成200 TCID₅₀/0.1 ml，取2.0 ml与等量抗伪狂犬病毒特异性血清（中和抗体效价不低亍�/span>1∵�span lang="EN-US">16）混合，�?/span>37ℂ�/span>中和1小时。同时设病毒对照＇�/span>2.0 ml�?/span>200 TCID₅₀/0.1 ml的病毒悬液与等量皃�/span>DMEM培养基混合）和空白对照（2.0 ml抗伪狂犬病毒特异性血清与等量皃�/span>DMEM培养基混合），置37ℂ�/span>作用1小时。然后将上述作用后的混合液各接种PK-15戕�/span>IBRS-2细胞已长成单层的6孔细胞培养板3孔（每孔500μl），吸附1小时，补兄�/span>DMEM维持液（�?/span>5%犊牛血清�?/span>100 U/ml青霉素�?/span>100 μg/ml链霉素的DMEM培养液）臲�/span>3.0 ml，置37ℂ�/span>培养，每日观寞�/span>2次，共观寞�/span>3日，对无病变者应盲传3代。试验组和空白对照组应无细胞病变，病毒对照应出现细胞病变＇�/span>CPE）、�/span>

【外源病毒检验【�/span>＇�/span>1）鄂A野毒的检骋�/span>按附注进行检验，应符合规定、�/span>

＇�/span>2）其它外源病毒的检骋�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无外源病毒污染、�/span>

【病毒含量测定【�/span>将疫苗用DMEM生长液（�?/span>10%犊牛血清�?/span>100 U/ml青霉素�?/span>100 μg/ml链霉素的DMEM培养液）稀释至冻干前体积，然后偙�/span>10倍系列稀释，叕�/span>10^-3.0�?/span>10^-4.0�?/span>10^-5.0�?/span>10^-6.04个稀释度，每个稀释度接种96孔微量细胞培养板一纵排兰�/span>8孔，每孔100 μl，再在每孔加�?/span>PK-15戕�/span>IBRS-2细胞悬液100 μl，在37ℂ�/span>下培养观寞�/span>5日，80%以上细胞病变（细胞黑色颗粒增多、圆缩、拉网、脱落）判为感染，计箖�/span>TCID₅₀。每头份病毒含量应不低于10^5.0TCID₅₀、�/span>

【安全检验【�/span>�?/span>18｝�/span>21日龄仔猪＇�/span>PRV中和抗体效价不高亍�/span>1∵�/span>2（�/span>4头，各肌肉注射或滴鼻接种疫苗10头份，连续测量体�?/span>7日，仔猪应体温正常并无其它不良反应、�/span>

【效力检验【�/span>�?/span>1日龄猪（PRV中和抗体效价不高亍�/span>1∵�/span>2（�/span>4头，各肌肉注射疫苖�/span>1头份＋�/span>21日后，连同对照猪3头，各滴鼻攻出�/span>PRV鄁�/span>A株病毒液1ml（含10^7.0TCID₅₀），观察14日。对照猪应全部发痄�/span>（体温不低于40ℂ�/span>，至少持�?/span>2日、精神沉郁），免疫猪应全部保护、�/span>

【剩余水分测定【�/span>挈�/span>附录顴�/span>进行测定，应符合规定、�/span>

【真空度测定【�/span>挈�/span>附录顴�/span>进行测定，应符合规定、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防猪伪狂犬病。注苗第7日产生免疫力，免疫期丹�/span>6个月、�/span>

【用法与用量【�/span>＇�/span>1（�/span>按瓶签注明头份，用灭菌生理盐水稀释，各皮下或肌肉注射1.0 ml＇�/span>1头份）、�/span>

＇�/span>2）推荐免疫程序为９�/span>PRV抗体阴性仔猪，在出生后1周内滴鼻或肌肉注射；具有PRV母源抗体的仔猪，�?/span>45日龄左右肌肉注射；经产母猪每4个月免疫1次；后备母猪6月龄左右肌肉注射免疫1次，间隔1个月后加强免�?/span>1次，产前1个月左右再免�?/span>1次；种公猪每年春、秋季各免疫1次、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1）疫苗在运输、保存、使用过程中应防止高温、消毒剂和阳光照射、�/span>

＇�/span>2）应对注射部位进行严格消毒、�/span>

＇�/span>3）疫苗稀释后，限2小时内用完、�/span>

＇�/span>4）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>＇�/span>1（�/span>10头份/瓵�/span>＇�/span>2（�/span>20头份/瓵�/span>

【贮藏【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>6个月；－20ℂ�/span>以下保存，有效期丹�/span>12个月、�/span>

附注９�/span>鄁�/span>A野毒的检骋�/span>

设计特异扩增PRV TK基因的引物和LacZ基因的引物对疫苗毒中的鄂A野毒进行检测，若有鄁�/span>A野毒应扩增出953 bp的带，耋�/span>TK^-/gG^-/LacZ⁺疫苗毒应只扩增出748 bp的特异性条带和433 bp皃�/span>LacZ基因片段、�/span>

1. PCR用模松�/span>DNA的提取：将病毒按细胞原培养液10%的量接种PK-15戕�/span>BHK-21细胞＋�/span>80%以上细胞病变后用吸管吹下病变的细胞，叕�/span>500μl病变的细胞悬液，4000 r/min离心5分钟。弃上清，沉淀�?/span>20μl ddH₂O重悬。加�?/span>20μl 10% SDS�?/span>20μl 0.1 mol/L EDTA咋�/span>2.0μl 20 mg/ml蛋白酵�/span>K，混匀名�/span>50ℂ�/span>水浴作用2｝�/span>3小时戕�/span>37ℂ�/span>水浴作用10~12小时。加等量苯酚∵�/span>氯仿∵�/span>异戊醇（25∵�/span>24∵�/span>1），涡旋混匀、�/span>12000 r/min离心10分钟。将上清移入另一EP管，加入2倍体积的无水乙醇，混匀后－20ℂ�/span>放置30分钟、�/span>12000 r/min离心10分钟。倒掉乙醇，加�?/span>200μl 75%乙醇漂洗一次。吸弃乙醇，将沉淀抽干或自然风干。加20μl dd H₂O溶解沉淀，－20ℂ�/span>保存备用、�/span>

2. PCR引物、扩增基因及大小（见�?/span>1）、�/span>

�?/span>1PCR引物、扩增基因及大小

秌�/span>籺�/span>	弔�/span>�?/span>	目的基因	扩增大小＇�/span>bp（�/span>
猪伪狂犬病毒	5‘�/span>-TCTGTTCGACACGGACAC-3‘�/span> 5‘�/span>-GGGATGACATACACACATGGC-3‘�/span>	TK	缺失毑�/span>	748
			野毒	953

3.TK基因扩增的反应体系：

10×Buffer5.0μl

15 mmol/L MgCl₂5.0μl

2.0 mmol/L dNTPs1.0μl

上游引物＇�/span>20 μmol/L（�/span>1.0μl

下游引物＇�/span>20 μmol/L（�/span>1.0μl

模板5.0μl

Taq DNA聚合酵�/span>0.5μl＇�/span>2.5 U（�/span>

20%甘油25μl

ddH₂O6.5μl

总体�?/span>50μl

4. LacZ基因皃�/span>PCR扩增９�/span>

引物

Ps９�/span>5‘�/span>-GAACTGCCTGAACTACC-3‘�/span>

Pr９�/span>5‘�/span>-ACTGCAACAACGCTGC-3‘�/span>

反应体系９�/span>

10×Buffer5.0μl

1.5 mol/L MgCl₂1.67μl

2.0 mmol/L dNTPs1.0μl

上游引物＇�/span>20 μmol/L（�/span>1.0μl

下游引物＇�/span>20 μmol/L（�/span>1.0μl

模板5.0μl

Taq DNA聚合酵�/span>0.5μl＇�/span>2.5 U（�/span>

20%甘油25μl

ddH₂O9.83μl

总体�?/span>50μl

5.反应条件９�/span>95ℂ�/span>变�?/span>5分钟后进入循环：95ℂ�/span>1分钟�?/span>50ℂ�/span>1分钟�?/span>72ℂ�/span>1分钟＋�/span>35个循环后72ℂ�/span>延伸10分钟、�/span>

6.结果判定：反应完成以后，叕�/span>10μlPCR产物亍�/span>0.8％琼脂糖凝胶上电泳，同时三�/span>DNA Marker作参照，电泳名�/span>EB染色，紫外灯下观察、�/span>

7.结果判定标准：用TK^-/gG^-/LacZ⁺疫苗毒接种后病变的细胞为模板，应只能扩增出大小为748 bp皃�/span>PRV HB-98株的TK基因片段咋�/span>433 bp皃�/span>LacZ基因片段，而不能扩增出953 bp的片段，但以PRV鄁�/span>A野毒接种的细胞为模板应扩增出953 bp的特异性片段、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由华中农业大学中牧实业股份有限公司申请注册，农业部公告623号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

2.【鉴别检验】项：将“抗伪狂犬病毒特异性血清”改为“抗伪狂犬病毒特异性血清（中和抗体效价不低亍�/span>1∵�/span>16）”――细化标准、�/span>

3.【外源病毒检验】项：增加小标题，并规范文字表述、�/span>

4.规范文字，如规范【无菌检验】、【支原体检验】、【剩余水分测定】、【真空度测定】的表述方法；将‛�/span>min”（非单位表示时）改为“分钟”；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>1 ml修约丹�/span>1.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

5.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项，并规范了【注意事项】中第（4）条的文字表述、�/span>

6.本标准发布后，原由华中农业大学中牧实业股份有限公司申请注册、农业部公告623号发布的‛�/span>猪伪狂犬病活疫苗＇�/span>HB，�/span>98株）“�/span>标准废止、�/span>

猪伪狂犬病活疫苗＇�/span>SA215株）

Zhu Weikuangquanbing Huoyimiao＇�/span>SA215 Zhu（�/span>

Pseudorabies Vaccine＋�/span>Living＇�/span>Strain SA215（�/span>

本品系用三基因（TK�?/span>gI�?/span>gE基因）缺失的伪狂犬病病毒SA215株接秌�/span>SPF鸡胚成纤维细胞培养，收获细胞培养物，加适宜保护剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防猪伪狂犬病、�/span>

【性状【�/span>海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无菌生长、�/span>

【支原体检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应无支原体生长、�/span>

【外源病毒检验【�/span>按附彔�/span>页进行检验，应符合规定、�/span>

【鉴别检验【�/span>将疫苗稀释成10⁴PFU / ml，与PRV特异性血清（中和指数丹�/span>700｝�/span>1000）等量混合，37ℂ�/span>中和1小时，同时设病毒对照，分别接秌�/span>Vero细胞单层。置二氧化碳培养箰�/span>37ℂ�/span>培养3｝�/span>5日，观察细胞病变＇�/span>CPE）。病毒对照组应出现细胞圆缩、融合形成空斑等细胞病变，中和组应不出现CPE、�/span>

【病毒含量测定【�/span>用维持液将疫苗作10倍系列稀释，叕�/span>10^-3�?/span>10^-4�?/span>10^-5�?/span>10^-6�?/span>10^-75个稀释度，每个稀释度分别接种6孔盘内培养形成的致密Vero细胞单层1孔，每孔0.1ml＋�/span>37ℂ�/span>吸附1小时。每孔加�?/span>EMEM液（含甲基纤维素0.5%（�/span>2.0｝�/span>3.0 ml，置二氧化碳培养箰�/span>37ℂ�/span>培养3｝�/span>4日，吸去上清液，�?/span>1%结晶紫、福尔马林染液染艱�/span>20分钟，弃染色液，计算蚀斑数，应不低亍�/span>10^5.0PFU/头份、�/span>

【安全检验【�/span>�?/span>20｝�/span>22日龄健康易感＇�/span>PRV中和抗体效价不高亍�/span>1∵�/span>4）仔�?/span>2头，各肌肉注射疫苖�/span>2头份，观寞�/span>7日，均应无反应、�/span>

【效力检验【�/span>�?/span>20｝�/span>22日龄健康易感＇�/span>PRV中和抗体效价不高亍�/span>1∵�/span>4）仔�?/span>4头，各肌肉注射疫苖�/span>1头份。然后，下列方法任择其一、�/span>

1血清中和抗体检浊�/span>28日后，连同条件相同的对照�?/span>4头，分别采血，分离血清，测定血清中和抗体滴度。对照猪中和抗体效价均应不高亍�/span>1∵�/span>4，免疫猪中和抗体效价均应不低亍�/span>1∵�/span>30、�/span>

2免疫攻毒28日后，连同条件相同的对照�?/span>4头，各滴鼻攻出�/span>PRV Fa株病毒液1.0 ml（含10^6.0PFU），观察7日。对照猪应全部发病并至少死亡2头，免疫猪应全部保护、�/span>

【剩余水份测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【真空度测定【�/span>按附彔�/span>页进行测定，应符合规定、�/span>

【作用与用途【�/span>用于预防猪伪狂犬病。主动免疫力在接种后7日开始产生，免疫期为112日；被动免疫力的免疫期至仔猪出生名�/span>21｝�/span>28日、�/span>

【用法与用量【�/span>按瓶签注明头份，�?/span>PBS＇�/span>pH倻�/span>7.2）稀释后，肌肉注射，每头1.0 ml＇�/span>1头份）。对于母猪，于配种前接种，对其所产仔猪，可在出生名�/span>21｝�/span>28日接种；对非免疫母猪所产仔猪，可在出生名�/span>7日内接种；对种公猪，每年春、秋季各接种1次、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1）本品稀释后，限当日用完、�/span>

＇�/span>2）使用过程中应注意避免疫苗病毒扩散、�/span>

＇�/span>3）应对注射部位进行严格消毒、�/span>

＇�/span>4）疫苗在运输、保存、使用过程中应防止高温、消毒剂和阳光照射等、�/span>

＇�/span>5）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理、�/span>

【贮藏【�/span>�?/span>2｝�/span>8ℂ�/span>下，有效期为1年、�/span>

【规格【�/span>4头份/瓶�?/span>10头份/瓶�?/span>50头份/瓶、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由四川农业大学、四川华神农大动物保健药品有限公司申请注册，农业部公呉�/span>297号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.【性状】项：删除对颜色的描述、�/span>

2.规范文字，如规范【无菌检验】、【支原体检验】、【外源病毒检验】、【剩余水分测定】、【真空度测定】的表述方法；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>1 ml修约丹�/span>1.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

3.增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项，并将【注意事项】项中第＇�/span>1）条的后半句改为第（5）条。――规范文字表述、�/span>

4.本标准发布后，原由四川农业大学、四川华神农大动物保健药品有限公司申请注册、农业部公告297号发布的‛�/span>猪伪狂犬病活疫苗＇�/span>SA215株）“�/span>标准废止、�/span>

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC ELISA抗体检测试剂盒

Koutiyi Bingdu fei Jiegou Danbai ELISA Kangti Jiance Shijihe

Foot and Mouth Disease Virus Nonstructural Protein ELISA Antibody Detection kit

本品系用大肠杆菌表达的口蹄疫病毒非结构蛋發�/span>3ABC，经纯化、复性后作为抗原，包�?/span>ELISA板，与八种制剂，包括稀释液、抗体、缓冲液、终止液和洗涤液等制成。用于检测牛、羊、猪血清中的口蹄疫病毒非结构蛋發�/span>3ABC抗体，区分病毒感染动物和灭活疫苗免疫动物、�/span>

』�/span>性状【�/span>应密封完好、组分齐全、无破损、无渗漏、�/span>

【无菌检验【�/span>按附彔�/span>页对阳性血清、阴性血清和血清稀释液进行检验，均应无菌生长、�/span>

【效价检验【�/span>抽取一批生产的试剂监�/span>1件，按试剂盒说明书操作，检测阳性、阴性血清，阳性血渄�/span>OD_450nm值不低于0.6，阴性血渄�/span>OD_450nm值不高于0.2，为合格、�/span>

【特异性检验【�/span>按【用法与判定】进行，检测非注苗非感染正常牛、羊和猪血清、口蹄疫灭活疫苗免疫牛、羊和猪血渄�/span>20份，结果库�/span>95%以上为阴性、�/span>

【敏感性检验【�/span>按【用法与判定】进行，检测口蹄疫病毒感染牛、羊和猪1｝�/span>5个月的血渄�/span>20份，结果库�/span>100%为阳性、�/span>

【作用与用途【�/span>用于检测牛、羊、猪的口蹄疫病毒非结构蛋發�/span>3ABC抗体。可用于病毒感染动物和灭活疫苗免疫动物的鉴别诊断、�/span>

【用法与判定【�/span>将试剂盒配备皃�/span>25倍浓�?/span>PBST用无离子水或蒸馏水做1∵�/span>25倍稀释后，进行如下操作：

＇�/span>1）待检血清样品和阳性、阴性对照血清用血清稀释液1∵�/span>21倍稀释（120 μl血清稀释液加血渄�/span>6 μl），每孔加入100 μl，阴、阳性对照血清样品平行加两孔，用封口膜封口，37ℂ�/span>结合30分钟、�/span>

＇�/span>2）取掉封口膜，每孔加满洗涤液，洗涣�/span>5次，最名�/span>1次拍干、�/span>

＇�/span>3）用血清稀释液挈�/span>1∵�/span>100比例稀释酶标二抗，每孔加入100 μl，用封口膜封口，37ℂ�/span>结合30分钟、�/span>

＇�/span>4）取掉封口膜，每孔加满洗涤液，洗涣�/span>5次，最名�/span>1次拍干、�/span>

＇�/span>5）将底物A挈�/span>1∵�/span>50比例（体积比）稀释于底物B中（1.0 ml底物B中加�?/span>20 μl的底�?/span>A），吹打混匀，每孔加�?/span>100 μl，封口膜封口＋�/span>37ℂ�/span>避光作用10｝�/span>15分钟、�/span>

＇�/span>6）每孔加�?/span>100 μl终止液、�/span>

＇�/span>7）轻轻摇振混匀，测定波镾�/span>450 nm吸光值（OD_450nm值）、�/span>

＇�/span>8）阳性对照平坆�/span>OD值应高于0.6；阴性对照平坆�/span>OD值应小于0.2、�/span>

＇�/span>9）结果计算：样品效价丹�/span>=＇�/span>OD样品，�/span>OD阴性）÷＇�/span>OD阳性－OD阴性）、�/span>

＇�/span>10）判定：若效价小亍�/span>0.2，为阴性；效价�?/span>0.2｝�/span>0.3之间为可疑；效价高于0.3为阳性。可疑和阳性样品应进行复测，复测为可疑或者阳性时，应判为阳性、�/span>

96孔酶标板布局国�/span>

	1	2		3		4		5	6	7	8	9	10	11	12
A	阴�?/span>
B	阴�?/span>
C	阳�?/span>
D	阳�?/span>
E
F
G
H

【注意事项【�/span>＇�/span>1）严格遵守生物安全规定、�/span>

＇�/span>2）操作活病毒应在生物安全三级＇�/span>P3）实验室进行、�/span>

＇�/span>3）来自疫区和实验室的所有感染动物的血清，应在生物安全条件下，56ℂ�/span>30｝�/span>40分钟处理、�/span>

＇�/span>4）确保酶标板密封，严防酶标板受潮、�/span>

＇�/span>5）严格按试剂盒使用说明操作，特别注意控制标明的时间、�/span>

＇�/span>6）试验废料、废水等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>2�?/span>96孔板/监�/span>

【贮藏与有效期【�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>保存，有效期丹�/span>6个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册，农业部公告752号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.【性状】项改为“应密封完好、组分齐全、无破损、无渗漏。”删除相关成分和装量等内容、�/span>

2.【无菌检验】项：明确规定对阳性血清、阴性血清和血清稀释液进行检验，而不是对所有液体进行检验、�/span>

3.【特异性检验】和【敏感性检验】项：将“按说明书进行操作”改为“按【用法与判定】进行”、�/span>

4.规范文字，如在数字和单位之间加空一格；尅�/span>1 ml修约丹�/span>1.0 ml；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

5.增加【作用与用途】、【用法与判定】和【注意事项】项，并对【注意事项】项中第＇�/span>6）条进行文字规范、�/span>

6.【规格】项：‛�/span>192仼�/span>/盒”改为‛�/span>2�?/span>96孔板/盒”、�/span>

7.本标准发布后，原由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册、农业部公告752号发布的‛�/span>口蹄疫病毒非结构蛋白3ABe ELIsA抗体检测试剂盒“�/span>标准废止、�/span>

口蹄�?/span>O型抗体液相阻�?/span>ELISA检测试剂盒

Koutiyi O Xing Kangti Yexiangzuduan ELISA Jiance Shijihe

Liquid-phase Blocking ELISA Kit for Detecting Food and MouthDisease Virus O Type Antibodies

本品系采用口蹄疫O型灭活病毒，经蔗糖密度梯度离心纯化，制备兔抗血清和豚鼠抗血清，兔抗血清包�?/span>ELISA板，并配以病毒抗原、豚鼠抗血清、兔抗豚鼟�/span>IgG一辣根过氧化物酶结合物、底物溶液、洗涤液、终止液等制成，用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄�?/span>O型病毒抗体、�/span>

【性状【�/span>应密封完好、组分齐全、无破损、无渗漏、�/span>

【无菌检验【�/span>挈�/span>附录顴�span>进行检验，试剂盒中的各种试剂均应无菌生长、�/span>

【效价检验【�/span>按【用法与判定】进行，口蹄�?/span>O垊�span>阳性对照抗体效价应�?/span>1∵�/span>1024±1滴度以内，口蹄疫O型阴性对照血清抗体效价应低于1∵�/span>8、�/span>

【无菌检验【�/span>挈�/span>附录顴�span>进行检验，试剂盒中的各种试剂均应无菌生长、�/span>

【效价检验【�/span>按【用法与判定】进行，口蹄�?/span>O垊�span>阳性对照抗体效价应�?/span>1∵�/span>1024±1滴度以内，口蹄疫O型阴性对照血清抗体效价应低于1∵�/span>8、�/span>

【特异性检验【�/span>按【用法与判定】进行，测定口蹄�?/span>O型�?/span>A型�?/span>C型、亚洱�/span>1型和猪水泡病鼠毒感染牛或猪阳性血清，与口蹄疫O型阳性血清应呈阳性反应，与口蹄疫其他型和猪水泡病阳性血清应呈阴性反应、�/span>

【作用和用途【�/span>用于检测牛、羊、猪等偶蹄动物血清中口蹄�?/span>O型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体的检测、�/span>

【用法与判定【�/span>＇�/span>1（�/span>�?/span>96孔血渄�/span>/病毒抗原反应板上，以50 ?l/孔的量用洗涤液两倍连续稀释被检血清，仍�/span>1∵�/span>4臲�/span>1∵�/span>512。同时稀释阳性对照血清，仍�/span>1∵�/span>8｝�/span>1∵�/span>1024；稀释阴性对照血清，仍�/span>1∵�/span>2｝�/span>1∵�/span>4；将病毒抗原用洗涤液稀释至工作浓度＇�/span>1∵�/span>4），�?/span>50 ?l/孔的量加入被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，振荡＋�/span>4ℂ�/span>过夜。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，变为1∵�/span>8｝�/span>1∵�/span>1024、�/span>

＇�/span>2（�/span>将血渄�/span>/病毒反应板上的各孔血渄�/span>/病毒抗原混合液转移到已包被的ELISA板上相对应孔＋�/span>50 ?l/孔，37ℂ�/span>孵育60分钟、�/span>

＇�/span>3（�/span>用洗涤液连续洗板5次，在吸水纸上甩干，用豚鼠抗血清稀释液尅�/span>口蹄�?/span>O垊�/span>豚鼠抗血清稀释至使用浓度＇�/span>1∵�/span>800），50 ?l/孔，加入ELISA板，37ℂ�/span>孵育60分钟、�/span>

＇�/span>4（�/span>用洗涤液连续洗板5次，在吸水纸上甩干，用洗涤液将兔抗豚鼟�/span>IgG—�/span>辣根过氧化物酶结合物稀释至使用浓度＇�/span>1∵�/span>1000），每孔50 ?l加入ELISA板孔＋�/span>37ℂ�/span>孵育60分钟、�/span>

＇�/span>5（�/span>用洗涤液连续洗板5次，在吸水纸上甩干，每孔功�/span>50 ?l底物溶液＋�/span>37ℂ�/span>＋�/span>15分钟、�/span>15分钟后每孔再功�/span>50 ?l终止液终止反应，在酶标仪上读叕�/span>492 nm波长处的OD₄₉₂nm值、�/span>

＇�/span>6（�/span>对照的设立：每块板设口蹄�?/span>O垊�/span>病毒抗原对照4孔和口蹄�?/span>O垊�/span>阴阳性血清对照，病毒抗原对照不加任何血清，直接�?/span>PBST稀释至使用浓度，与血渄�/span>/病毒抗原复合物同步加�?/span>ELISA板孔＋�/span>50 ?l/孓�/span>。病毒抗原对照至尐�/span>2个孔皃�/span>OD₄₉₂nm值在1.0｝�/span>2.0范围内、�span>阳性对照抗体效价应�?/span>1∵�/span>1024±1滴度以内。阴性对照血清抗体效价应低于1∵�/span>8、�/span>

＇�/span>7）结果判定：以病毒抗原对照平坆�/span>OD₄₉₂nm值的50%为临界值，被检血渄�/span>OD492nm值大于临界值的孔为阴性孔，低于等于临界值的孔为阳性孔，阳性孔等于临界值时所对应的稀释度为被检血清的抗体效价、�/span>

抗体效价高于1∵�/span>40判为口蹄�?/span>O型抗体阳性；接近1∵�/span>40判为可疑，应重测1次、�/span>

【注意事项【�/span>＇�/span>1（�/span>试剂盒应2｝�/span>8ℂ�/span>冷藏运输、�/span>

＇�/span>2（�/span>解冻皃�/span>OPD溶液加入双氧水后�?/span>1次用完，剩余不能重复使用、�/span>

＇�/span>3（�/span>病毒抗原冻融次数不能超过3次、�/span>

＇�/span>4）试验废料、废水等应进行无害化处理、�/span>

【规格【�/span>10�?/span>96孔板/监�/span>

【贮藏与有效期【�/span>除口蹄疫O型病毒抗原：，�/span>20ℂ�/span>存放；其余试剂盒组分９�/span>2｝�/span>8ℂ�/span>存放，有效期丹�/span>6个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册，农业部公告741号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.【性状】项改为“应密封完好、组分齐全、无破损、无渗漏。”删除相关成分和装量等内容、�/span>

2.【无菌检验】项：明确规定对阳性血清、阴性血清和血清稀释液进行检验，而不是对所有液体进行检验、�/span>

3.【特异性检验】和【敏感性检验】项：将“按说明书进行操作”改为“按【用法与判定】进行”、�/span>

4.规范文字，如在数字和单位之间加空一格；用文字表述‛�/span><”、‛�/span>≤”、‛�/span>>”和‛�/span>�?/span>”符号等、�/span>

5.增加【作用与用途】、【用法与判定】和【注意事项】项，并在【注意事项】项中增加第＇�/span>4）条、�/span>

6.将【规格】与【包装】项合并为“』�/span>规格【�/span>10�?/span>96孔板/盒”、�/span>

7.本标准发布后，原由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册、农业部公告741号发布的‛�/span>口蹄�?/span>O型抗体液相阻�?/span>ELISA检测试剂盒“�/span>标准废止、�/span>

口蹄疫亚洱�/span>1型抗体阻�?/span>ELISA抗体检测试剂盒

Koutiyibingdu Yazhouyixing RT-PCR Jianceshijihe

Foot and Mouth DiseaseVirus Type Asia1RT-PCR detection Kit

本品系由变性液、醋酸钠溶液、酚/氯仿/异戊醇混合液、异丙醇、无菋�/span>DEPC水、矿物油、溴化乙锭溶液�?/span>50×TAE电泳缓冲液、上样缓冲液、阴性对照样品、反转录阳性对照样品�?/span>RT-PCR反应液�?/span>75％乙醇�?/span>RNA酶抑制剂�?/span>TaqDNA聚合酶�?/span>AMV反转录酶�?/span>PCR扩增对照模板、反转录阳性对照引�?/span>18种试剂组成。用于可能感染亚洱�/span>1型口蹄疫病毒动物组织、水疱皮、水疱皮液、细胞培养物中口蹄疫病毒亚洲1垊�/span>RNA的检测和鉴定、�/span>

』�/span>性状【�span lang="EN-US">库�/span>密封完好、无变形、组分齐全、无破损、无渗漏、标签字迹清晰、�/span>

』�/span>无菌检骋�/span>【�/span>按附彔�/span>页对阴性对照样品�?/span>反转彔�/span>阳性对照样品和RT-PCR反应液进行检验，均应无菌生长、�/span>

』�/span>敏感性检骋�/span>【�/span>用试剂盒检浊�/span>反转录阳性样�?/span>敏感性质控样�?/span>RS1�?/span>RS2�?/span>RS3�?/span>RS4，按反转录阳性对照样品检测方法进行检测（在反应体糺�/span>中加入反转录对照引物1.0 ?l），反转录阳性对照成立的情况下，检测样品出现与反转录阳性对照相同大小片段时（约292 bp（�/span>,判定为阳性；否则，为阴性、�/span>重复检浊�/span>3次，试剂监�/span>合格皃�/span>判定标准丹�/span>RS1�?/span>RS2�?/span>RS3样品均为阳性，RS4样品检测结果可为阳性或阴性，归�/span>RS4为阳性性时，检测阳性带的亮度：RS1>RS2>RS3>RS4、�/span>

用试剂盒寸�/span>PCR扩增阳性对照模板敏感度质控样品AS1�?/span>AS2�?/span>AS3�?/span>AS4检浊�/span>3次。合格试剂盒的标准为９�/span>AS1�?/span>AS2�?/span>AS3样品均为阳性，AS4样品检测结果可阳性或阴性，归�/span>AS4为阳性时，检测阳性带的亮度：AS1>AS2>AS3>AS4、�/span>

』�/span>特异性检骋�/span>�用试剂盒检浊�/span>11份特异性质控样品：猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、牛病毒性腹泻病毒、羊痘病毑�/span>疫苗�?/span>�?/span>口蹄疫病毑�/span>OMⅠ�/span>系毒株、口蹄疫病毒O型弱毒疫苗、口蹄疫病毒A型弱毒疫苗，均由中国动物疫病预防控制中心提供、�/span>每份样品重复检浊�/span>3次。判定合格标准为每份样品3次检测全部为阴性、�/span>

【作用与用途�本试剂盒系采用反转录咋�/span>PCR扩增一步法寸�/span>亚洲1垊�/span>口蹄疫感病毒皃�/span>RNA进行检测、�/span>用于可能感染亚洲1型口蹄疫病毒动物组织、水疱皮、水疱皮涱�span>、细胞培养物中亚洱�/span>1型口蹄疫病毒RNA的检测和鉴定、�/span>

』�/span>用法与判宙�/span>【�/span>

1用法

1.1样品准备

1.1.1样本采集、保存及运输

1.1.1.1样品采集采集发病动物（牛、羊或猪）未破裂的舌面或蹄部、鼻镜、乳头等部位的水泡皮和水泡液；采集样品均置于2.0 ml 50%甘油生理盐水＋�/span>2｝�/span>8℃保存。送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）

1.1.1.2样本保存采集的样品在2｝�/span>8℃条件下保存应不超过24小时；—�/span>70℃条件以下可长期保存，在保存期间要避免反复冻融，最多冻螌�/span>3次、�/span>

1.1.1.3样本运输置于加冰的冰壶或泡沫箱内运输，运输过程中保证容器内温度保持在2~8℃，24小时内运至检测地点、�/span>

1.2样品处理

1.2.1组织样品处理称取待检病料0.05 g置研磨器中剪碎并研磨，加�?/span>600 ?l A液继续研磨。取已研磨好的待检病料上清300 ?l咋�/span>100 ?lA液，�?/span>1.5 ml灭菌离心管中、�/span>

1.2.2液态样品处琅�/span>叕�/span>200 ?l，置1.5 ml灭菌离心管中，加�?/span>200 ?l A液，混匀、�/span>

1.2.3反转彔�/span>阳性对照处理：叕�/span>200 ?l，置1.5 ml灭菌离心管中，加�?/span>200 ?l A液，混匀、�/span>

1.2.4阴性对照处琅�/span>叕�/span>200 ?l，置1.5 ml灭菌离心管中，加�?/span>200 ?l A液，混匀、�/span>

1.3病毒RNA提取取已处理的待检样品、阴性对照样品、阳性对照样品，每管依次加入醋酸钠溶涱�/span>30 ?l、酚/氯仿/异戊醇混合液300 ?l（取酙�/span>/氯仿/异戊醇混合液之前不要晃动，不要吸到酚/氯仿/异戊醇混合液上层保护液；此液有很强的腐蚀性，切勿沾到皮肤或衣物，否则立即用大量清水冲洗并擦干），颠們�/span>10次，混匀（不宜过于强烈震荡，以免产生乳化而不分层），冰浴15分钟＋�/span>4ℂ�/span>13000 g离心15分钟。取300 ?l上清置于新的经无菋�/span>DEPC水处理过皃�/span>1.5 ml灭菌离心管中（注意不要吸出和破坏分界层），加�?/span>300 ?l异丙醇，混匀，置液氮3分钟或—�/span>70℃冰箱中30分钟。室温融化，4ℂ�/span>20000 g离心20分钟（注意固定离心管方向，即将离心管开口朝离心机转轴方向放置）。弃上清，沿离心管开口方向管壁缓缓滴入－20℃预冷的75％乙醇溶涱�/span>1.0 ml，轻轻旋转一周后倒掉，将离心管倒扣于吸水纸三�/span>1分钟（不同样品严禁放在吸水纸同一地方吸干），真空抽干15分钟（以无乙醇味为准）。用9.0 ?l无菌DEPC水和1.0 ?l RNA酶抑制剂沿离心管开口相反方向溶解沉淀，备用、�/span>

1.4RT-PCR操作程序

1.4.1RT-PCR反应液体系配刵�/span>N个检测样品反应体系配制为：取21.5×＇�/span>N+4（�/span>?l RT-PCR反应涱�/span>(用前融化，混匀)�?/span>0.3×＇�/span>N+4（�/span>?l RNA酶抑制剂�?/span>0.2×＇�/span>N+4（�/span>?l反转录酶�?/span>1×＇�/span>N+4（�/span>?l TaqDNA聚合酶，混匀。取N+3�?/span>0.2 ml薄壁PCR管作好标记，将配制的混合液以每管23 ?l分配至薄�?/span>PCR管中。根据标记分别加�?/span>2.0 ?l提取的样�?/span>RNA（一份样本换用一个吸头），其�?/span>3管分别作为反转录阳性对照�?/span>PCR扩增阳性对照和阴性对照。反转录阳性对照加�?/span>1.0 ?l反转录阳性对照样�?/span>RNA和反转录阳性对照引物各1.0 ?l：�/span>PCR扩增阳性对照加�?/span>PCR扩增对照模板2.0 ?l；阴性对照样品加入阴性对照样�?/span>RNA 2.0 ?l。混匀。加入矿物油一滴（�?/span>15 ?l）覆盖、�/span>

1.4.2反转录和PCR扩增程序尅�/span>0.2 ml薄壁PCR管放置在PCR扩增仪上进行以下温度控制程序９�/span>42ℂ�/span>45分钟＋�/span>95ℂ�/span>3分钟，直接进�?/span>95ℂ�/span>30秒�?/span>50ℂ�/span>40秒�?/span>72ℂ�/span>40秒循环，35个循环后＋�/span>72℃延伷�/span>10分钟、�/span>

1.5电泳�?/span>3.0 g琼脂糖置500 ml锥形瓶中，加�?/span>1×TAE电泳缓冲涱�/span>200 ml（取4.0 ml 50×TAE电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 ml），于微波炉中或电热器上熔解，再加入20 ?l溴化乙锭溶液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后尅�/span>PCR扩增产物15 ?l混合3.0 ?l上样缓冲液，加样于琼脂糖凝胶孔中，以5 V/cm电压电泳30分钟，紫外灯下观察结果，照相、�/span>

2判定在反转录阳性对照样品出�?/span>292bp扩增带，PCR扩增阳性对照样品出�?/span>415 bp扩增带，阴性对照样品无扩增带出�?/span>(引物带除夕�/span>)时，实验绒�span>果成立。被检样品出现292 bp扩增带或415 bp扩增�?span>为亚洱�/span>⅟�/span>型口蹄疫病毒阳性，否则为阴性、�/span>

』�/span>注意事项【�span lang="EN-US">＇�/span>1（�/span>本品仅供体外诊断用、�/span>

＇�/span>2）所有用于检测的废弃物品均应放入�?/span>1%次氯酸钠溶液的废物缸内，高压灭菌处理、�/span>

＇�/span>3（�/span>RT-PCR实验室应分配液区、模板提取区、扩增区和电泳区、�/span>RT-PCR工作流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。各区器材试剂专用，不可跨区使用。实验结束后立即�?/span>1%次氯酸钠戕�/span>75%酒精或紫外灯消毒工作台、�/span>

＇�/span>4）所有试剂应在规定的温度下保存，使用时先尅�/span>RT-PCR反应液拿到室温融化后使用，用毕立即放回原处，其它试剂现用现取，用完立即放回原处，不同批次试剂不能混用；勿使用过期的试剂盒、�/span>

＇�/span>5）在提取RNA时，尽量缩短操作时间，避兌�/span>RNA酶污染。离心管、吸头等在实验前应全部高压灭菌。用灭菌的镊子夹取离心管，打开和盖上离心管盖时避免手和手套接触离心管口、�/span>

＇�/span>6）用前将RT-PCR反应液�?/span>RNA酶抑制剂�?/span>AMV反转录酶咋�/span>TaqDNA聚合酶，5000 g离心15秒，使液体全部沉于管底。配制和分装RT-PCR反应液体系时应尽量避免产生气泡、�/span>

＇�/span>7）按试剂盒说明书要求准确吸取各种试剂，移液器�?/span>PCR仪等应定期校验、�/span>

＇�/span>8）溴化乙锭溶液具有致癌性，应小心操作。若沾到皮肤或衣物上，应立即用大量清水冲洗、�/span>

＇�span lang="EN-US">9（�/span>本试剂盒丹�/span>10头份/盒，在有效期限内，应�?/span>3次以内用完。不同批次的试剂盒成分不能混用、�/span>

＇�/span>10）试验废料、废水等应进行无害化处理、�/span>

』�/span>规格【�/span>10头份/盒、�/span>

』�/span>贮藏与有效期【�/span>试剂监�/span>2｝�/span>8℃保存，其中阴性对照样品�?/span>PCR扩增对照模板�?/span>反转录阳性对照引物、反转录阳性对照样品�?/span>RT-PCR反应液�?/span>75％乙醇�?/span>RNA酶抑制剂�?/span>TaqDNA聚合酶�?/span>AMV反转录酶保存于－20℃、�span>有效期为6个月、�/span>

修订说明９�/span>

新增品种，由中国农业科学院兰州兽医研究所申请注册，农业部公告741号发布。在原标准的基础上进行了以下修订９�/span>

1.通用名称（含汉语拼音名）‛�/span>亚洲I垊�/span>“�/span>均改丹�/span>‛�/span>亚洲1垊�/span>“�/span>，以下同、�/span>―—�/span>规范通用名称、�/span>

2.【性状】项改为“应密封完好、无变形、组分齐全、无破损、无渗漏、标签字迹清晰。”删除相关成分和装量等内容、�/span>

3.规范文字，如【无菌检验】项的文字表述；在数字和单位之间加空一格；尅�/span>2 ml修约丹�/span>2.0 ml等、�/span>

4.增发布的‛�/span>口蹄疫亚洱�/span>I型抗体液相阻�?/span>ELISA检测试剂盒“�/span>标准废止、�/span>

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