木聚糖酶(xylanase)是指可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称，主要包括外切β-1,4-木聚糖酶、内切β-1,4-木聚糖酶和β-木聚糖酶。木聚糖酶在饲料、食品、造纸、纺织、医药及能源等领域有着广泛的应用。作为饲用酶制剂，木聚糖酶可以有效消除木聚糖的抗营养作用，促进畜禽对粗饲料的消化吸收；作为新型的纸浆漂白助剂，木聚糖酶能降低漂白用氯，解决纸浆工业中的环境污染问题；木聚糖酶水解植物中的半纤维素，形成的戊糖进一步用于生产木糖醇、酒精、有机酸等产品，在可再生资源生物转化利用中具有重要作用。
本实验室前期筛选得到了一株高效降解木聚糖的菌株，本次试验将对该菌株固体发酵产的木聚糖酶进行酶学性质的研究，包括最适反应pH、pH稳定性、最适反应温度、热稳定性及耐受胃蛋白酶胰蛋白酶的能力等进行了测定，以期对该木聚糖酶有更为深入的认识，对该木聚糖酶的应用有一定的指导作用。
1 材料与方法
1.1 木聚糖酶由本实验室固体发酵获得。
1.2 试剂
燕麦木聚糖（X0627）、胃蛋白酶（P7000）、胰酶（T1005）均购自sigma公司。DNS试剂参见GB/T 23874-2009中DNS的配置方法。其余试剂为分析纯。
1.3 酶活测定方法
采用DNS分光光度法测定，具体方法参见GB/T 23874-2009。酶活定义：在37℃、pH为5.50的条件下，每分钟从浓度为5 mg/mL的木聚糖溶液中降解释放1 μmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。
2 试验设计
2.1 木聚糖酶的最适反应pH
分别用0.1 mol/L的不同pH（2.0、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、8.0）的缓冲液（pH≤8.0的用磷酸二氢钠－柠檬酸缓冲液，pH＞8.0的用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液）配制木聚糖底物，按国标测定酶活，以酶活最高者为100%，在其他条件下的酶活占最高酶活的百分数即为在此pH条件下的相对酶活。
2.2 木聚糖酶的pH稳定性
取等量酶液分别加入等量的上述不同pH（2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、9.0）的缓冲液，混匀后，在37℃水浴保温4 h，冰水浴冷却后按国标测定酶活。以酶活最高者为100%。
2.3 木聚糖酶的最适反应温度
用最适pH的缓冲液配置溶液，在30、40、45、50、55、60、65和70℃不同的温度下反应，按国标法测定酶活。以酶活最高的温度为最适反应温度。
2.4 木聚糖酶的热稳定性
用最适pH的缓冲液配置溶液，在50、55、60℃不同的温度下处理10、20、40、60、80、100、120 min，按国标法测定酶活。以未处理酶的酶活为100%。
2.5 胃蛋白酶和胰酶对木聚糖酶活性的影响
在0.5 mL木聚糖酶溶液中，分别加入0.5 mL浓度为0.01 mg/mL的胃蛋白酶溶液（用pH2.0，浓度为0.01 mol/L的HCl溶液配置）和0.5mL浓度为0.2 mg/mL胰酶（用pH7.0，浓度为0.1 mol/L的磷酸二氢钾缓冲液配置），在37℃水浴分别处理30、60、90 min，按国标法测定酶活。以未处理酶的酶活为100%。
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