饲用木聚糖酶的酶学性质研究

　　木聚糖酶(xylanase)是指可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称，主要包括外�?beta;-1,4-木聚糖酶、内�?beta;-1,4-木聚糖酶�?beta;-木聚糖酶。木聚糖酶在饲料、食品、造纸、纺织、医药及能源等领域有着广泛的应用。作为饲用酶制剂，木聚糖酶可以有效消除木聚糖的抗营养作用，促进畜禽对粗饲料的消化吸收；作为新型的纸浆漂白助剂，木聚糖酶能降低漂白用氯，解决纸浆工业中的环境污染问题；木聚糖酶水解植物中的半纤维素，形成的戊糖进一步用于生产木糖醇、酒精、有机酸等产品，在可再生资源生物转化利用中具有重要作用、�/p>

　　本实验室前期筛选得到了一株高效降解木聚糖的菌株，本次试验将对该菌株固体发酵产的木聚糖酶进行酶学性质的研究，包括最适反应pH、pH稳定性、最适反应温度、热稳定性及耐受胃蛋白酶胰蛋白酶的能力等进行了测定，以期对该木聚糖酶有更为深入的认识，对该木聚糖酶的应用有一定的指导作用、�/p>

　　1 材料与方泔�/p>

　　1.1 木聚糖酶由本实验室固体发酵获得、�/p>

　　1.2 试剂

　　燕麦木聚糖（X0627）、胃蛋白酶（P7000）、胰酶（T1005）均购自sigma公司。DNS试剂参见GB/T 23874-2009中DNS的配置方法。其余试剂为分析纯、�/p>

　　1.3 酶活测定方法

　　采用DNS分光光度法测定，具体方法参见GB/T 23874-2009。酶活定义：�?7℃、pH�?.50的条件下，每分钟从浓度为5 mg/mL的木聚糖溶液中降解释�? ��mol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U、�/p>

　　2 试验设计

　　2.1 木聚糖酶的最适反应pH

　　分别�?.1 mol/L的不同pH�?.0�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.0）的缓冲液（pH��8.0的用磷酸二氢钠－柠檬酸缓冲液，pH�?.0的用甘氨�?氢氧化钠缓冲液）配制木聚糖底物，按国标测定酶活，以酶活最高者为100%，在其他条件下的酶活占最高酶活的百分数即为在此pH条件下的相对酶活、�/p>

　　2.2 木聚糖酶的pH稳定�?/p>

　　取等量酶液分别加入等量的上述不同pH�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.5�?.0�?.0）的缓冲液，混匀后，�?7℃水浴保�? h，冰水浴冷却后按国标测定酶活。以酶活最高者为100%、�/p>

　　2.3 木聚糖酶的最适反应温�?/p>

　　用最适pH的缓冲液配置溶液，在30�?0�?5�?0�?5�?0�?5�?0℃不同的温度下反应，按国标法测定酶活。以酶活最高的温度为最适反应温度、�/p>

　　2.4 木聚糖酶的热稳定�?/p>

　　用最适pH的缓冲液配置溶液，在50�?5�?0℃不同的温度下处�?0�?0�?0�?0�?0�?00�?20 min，按国标法测定酶活。以未处理酶的酶活为100%、�/p>

　　2.5 胃蛋白酶和胰酶对木聚糖酶活性的影响

　　�?.5 mL木聚糖酶溶液中，分别加入0.5 mL浓度�?.01 mg/mL的胃蛋白酶溶液（用pH2.0，浓度为0.01 mol/L的HCl溶液配置）和0.5mL浓度�?.2 mg/mL胰酶（用pH7.0，浓度为0.1 mol/L的磷酸二氢钾缓冲液配置），在37℃水浴分别处�?0�?0�?0 min，按国标法测定酶活。以未处理酶的酶活为100%、�/p>

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